科研产出
牛雄性生殖系干细胞的体外诱导分化
《生物工程学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：雄性生殖系干细胞(Male germ-line stem cells,mGSCs)是一群具有高度自我更新能力和分化潜能的细胞,是雄性成体内唯一可复制的二倍体永生细胞。转基因技术与雄性生殖系干细胞异体及异种移植技术相结合,将会为克隆动物、转基因动物生产及一些人类遗传性疾病的基因治疗提供新的机遇与途径。本试验采用组合酶消化和选择贴壁法,对5月龄、6月龄牛胎儿及新生牛雄性生殖系干细胞体外培养及分化进行了研究。试验结果显示,睾丸支持细胞对雄性生殖系干细胞体外增殖、分化所必需的,同时对数期睾丸支持细胞对雄性生殖系干细胞贴壁、增殖与分化效果明显;共培养16 d后,牛雄性生殖系干细胞分化为长形精子细胞,试验建立了牛雄性生殖系干细胞体外诱导培养分化体系。
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大白猪BF基因多态性与繁殖性状及胎盘效率关联研究
《遗传 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：文章以BF基因为产仔数的候选基因,运用PCR-RFLP方法对大白猪BF基因内含子1序列进行分析,发现内含子1第79bp处发生了C→T突变,命名为BF-intron1-C79T。所扩增PCR产物经SmaⅠ酶切后,可分出3种基因型,分别为CC、CT和TT。经χ2适合性检验,大白猪群体在该位点达到了Hardy-Weinberg平衡状态。将不同基因型与总产仔数(TNB)、产活仔数(NBA)、初生重(BW)和胎盘效率(PE)进行关联分析,结果发现,初产母猪在该位点上,CC基因型比CT基因型个体的TNB和NBA均多3.10头,但差异不显著(P>0.05);在BW和PE上,CC基因型均高于CT基因型,差异不显著(P>0.05)。经产母猪在该位点上,CC基因型比TT基因型个体的TNB和NBA分别多3.45头和3.92头,PE高23.80%,均达到显著水平;但CT基因型个体与CC和TT个体之间的TNB、NBA和PE差异不显著(P>0.05)。因此,BF-intron1-C79T位点可作为繁殖性状及胎盘效率的潜在分子育种标记,具有很大的研究价值。
舍饲新疆褐牛犊牛体重与体尺指标的相关及回归分析
《新疆农业科学 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：以2008年2至7月在乌鲁木齐种牛场跟踪测量的272头1～6月龄新疆褐牛犊牛体尺、体重数据为基础材料,探索了舍饲新疆褐牛犊牛的生长规律,分析了其体重与体尺指标的相关性,构建了估测舍饲新疆褐牛犊牛体重的回归模型。结果表明:舍饲新疆褐牛犊牛随着月龄的增加,相对于其他几个性状,更趋向于胸围和体重的快速增长;舍饲新疆褐牛犊牛体重与体高、体斜长、胸围、管围的相关系数分别为0.927、0.913、0.964、0.851,经检验四个相关系数均达到极显著水平(P<0.01);得到了4个估测体重的多元线性回归方程,对于公犊估测值与实测值之间的相关程度分别为0.975和0.973,对于母犊估测值与实测值之间的相关程度均为0.977,均达到极显著水平(P<0.01)。
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两奶牛场布氏杆菌分离鉴定及四种血清学检测方法比较
《中国人兽共患病学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：目的与方法用虎红平板凝集试验(RBT)、试管凝集试验(SAT)、间接酶联免疫吸附试验(iELISA)和竞争酶联免疫吸附试验(cELISA)4种血清学检测方法对华东区和新疆的两奶牛场的600头奶牛进行了布氏杆菌病检测,采集布氏杆菌病血清学检测为阳性的奶牛的奶样120份,进行病原分离与鉴定。结果分离到细菌17株,经革兰氏染色、柯兹罗夫斯基鉴别染色和PCR鉴定,17株分离菌株均为牛种布氏杆菌;4种血清学检测结果RBT平均阳性率为46.33%,SAT平均阳性率为41.00%,iELISA平均阳性率为48.17%,cELISA平均阳性率为40.50%。结论两奶牛场平均分菌率为14.17%,按国标标准方法SAT检疫血清阳性率为41.00%,RBT的敏感性和特异性为86.36%和85.71%,SAT的敏感性和特异性为84.09%和92.06%,iELISA的敏感性和特异性为86.36%和96.83%,cELISA的敏感性和特异性为95.45%和98.41%。iELISA和cELISA在敏感性和特异性方面均高于RBT和SAT。iELISA和cELISA可作为RBT和SAT的替代方法。
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DGAT1基因K232A突变位点在3个中国荷斯坦母牛群体中的基因型频率分布及其与产奶量的相关性
《基因组学与应用生物学 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：二脂酰甘油酰基转移酶1(acylCoA:diacylglycerol acyltransferase,DGAT1)基因是影响奶牛产奶性状的主效基因之一,其第八外显子上的第232位的赖氨酸转化为丙氨酸(K232A)的错义突变是影响产奶量、乳脂和乳蛋白含量的因果突变。本研究利用GenBank中已公布的牛DGAT1基因DNA序列,于K232A位点两端设计引物,采用PCR-RFLP方法鉴定来自新疆和江西的3个中国荷斯坦母牛群体共454个个体DGAT1基因K232A突变位点的基因型,使用SAS9.0软件分析供试群体基因型分布及其与产奶量的相关性。研究结果表明:K等位基因为441bp的PCR扩增片段,A等位基因为完全切开的202bp和239bp两片段。新疆1、新疆2和南昌金牛3个荷斯坦母牛群体在该位点上K等位基因的频率分别为51.9%、42.4%和27.2%;A等位基因的频率分别为48.1%、57.6%和72.8%。DGAT1基因K232A突变位点与三个母牛群体日平均产奶量的相关性分析发现在3个群体中KK型个体产奶量均低于AA型个体,但不同基因型个体间产奶量差异在统计学上没有显著差异。本研究为进一步探讨DGAT1基因在中国奶牛群体中的遗传效应及分子标记辅助选择培育良种奶牛提供参考。
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HSP70C融合草原兔尾鼠卵透明带3对小鼠抗生育的研究
《细胞与分子免疫学杂志 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：目的:探讨分枝杆菌热休克蛋白(HSP70)对草原兔尾鼠卵透明带3(LZP3)免疫不育效果的增强作用。方法:将HSP70全长和C端分别与LZP3融合构建pcD-L-HSP70和pcD-L-HSP70C重组质粒,同时与具有免疫不育功能的pcD-L和pcD-ACLC一起分别免疫NIH小鼠,分别检测重组质粒在机体真核细胞中的表达情况、T细胞增殖及体液免疫水平、抗生育效果、卵巢的病理变化和免疫荧光定位。结果:LZP3构建的重组质粒均能在小鼠肝脏中表达;免疫后能刺激机体T细胞增殖,尤其是pcD-ACLC和pcD-L-HSP70C免疫组(P<0·01);同时激发机体产生特异性抗体(P<0·05);除pcD-L-HSP70免疫组外其他3种重组质粒均具有抗生育效果(P<0·05),且pcD-ACLC和pcD-L-HSP70C极明显地降低了小鼠平均窝仔数(P<0·01)且未引发机体产生卵巢炎;直接免疫荧光结果表明在绿色激发光下小鼠卵母细胞的卵透明带均能发出绿色荧光。结论:与pcD-L-HSP70免疫相比,pcD-L-HSP70C能明显地降低小鼠平均窝仔数,这表明分枝杆菌热休克蛋白HSP70C端对增强LZP3免疫不育效果具有明显的基因佐剂功效。
关键词： 草原兔尾鼠卵透明带3 免疫不育 HSP70 融合佐剂
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牛卵胞质内显微受精中第一极体位置与激活方法研究
《西北农林科技大学学报(自然科学版) 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：【目的】探讨牛卵母细胞胞质内显微受精(ICSI)操作中,卵母细胞第一极体位置以及受精卵化学激活方法对ICSI卵体外发育的影响。【方法】采集牛卵巢,成熟培养卵母细胞后,调整其第一极体分别位于相当于时钟6点和12点的位置,进行牛卵母细胞胞质内显微受精,以ICSI卵不进行激活处理为未激活组,分别采用乙醇、离子霉素及离子霉素联合6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)激活ICSI卵,统计ICSI卵的形态完整率、卵裂率和囊胚发育率。【结果】第一极体分别位于相当于时钟6点和12点的位置时,所获得的ICSI卵形态完整率(92.9%和94.0%)、卵裂率(37.1%和40.0%)和囊胚发育率(12.9%和12.2%)均无统计学差异(P>0.05)。未激活组ICSI卵的卵裂率较低,不能发育到囊胚;用乙醇或离子霉素激活时,ICSI卵的卵裂率(25.7%和27.6%)和囊胚发育率(3.3%和3.4%)均显著高于未激活组(7.5%和0)(P<0.05);用离子霉素与6-DMAP联合激活时,ICSI卵的卵裂率和囊胚发育率分别为38.9%和13.9%,显著高于乙醇激活组、离子霉素激活组及未激活组(P<0.05)。【结论】对牛卵母细胞进行ICSI操作时,第一极体分别位于相当于时钟6点和12点位置时,对ICSI卵的发育无显著影响;采用离子霉素和6-DMAP联合激活,有利于ICSI卵的体外发育。
关键词： 牛卵胞质内显微受精 第一极体 化学激活 囊胚发育率
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牛体外受精卵与牛胎儿睾丸支持细胞体外共培养研究
《西北农林科技大学学报(自然科学版) 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：【目的】研究牛胎儿睾丸支持细胞对牛早期胚胎的体外发育是否有促进作用。【方法】从屠宰场采集5~7月龄胎牛睾丸,经原代和传代培养制备牛胎儿睾丸支持细胞(sertoli cells,SCs)饲养层,对比原代和传代胎牛睾丸SCs与牛体外受精卵共培养时受精卵的发育情况;分别以4×104,2×104mL-1两个密度接种传代胎牛睾丸SCs与牛受精卵体外共培养,并以培养液中无牛胎儿睾丸SCs饲养层为对照,研究体外牛胎儿睾丸支持细胞(sertoli cells,SCs)对牛受精卵体外发育的影响。【结果】与牛受精卵体外共培养时,接种密度为2×104mL-1传代胎牛睾丸SCs饲养层共培养组的卵裂率(79.3%)高于原代牛胎儿睾丸SCs饲养层共培养组(69.2%),但差异不显著(P>0.05);囊胚发育率(41.3%)极显著地高于原代SCs饲养层共培养组(16.7%)(P<0.01)。接种密度为4×104mL-1传代牛胎儿睾丸SCs饲养层共培养组的卵裂率大于接种密度为2×104mL-1传代牛胎儿睾丸SCs饲养层共培养组和对照组,但差异不显著;胚胎发育率极显著地低于接种密度为2×104mL-1传代牛胎儿睾丸SCs饲养层共培养组和对照组。【结论】制备的传代牛胎儿睾丸SCs饲养层,能有效促进牛体外受精卵的体外发育,提高囊胚发育率;接种的传代牛胎儿睾丸SCs饲养层密度过大,将严重影响牛体外受精卵的发育。
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布鲁氏菌VirB8-PCR方法的建立
《中国人兽共患病学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：目的建立VirB8-PCR方法,用于布鲁氏菌病的诊断和致病力因子的检测。方法以布鲁氏菌病致病力因子——四型分泌系统中的VirB8基因为模板,设计引物,建立VirB8-PCR方法,优化反应条件和程序,对布鲁氏菌标准株、疫苗株和当地分离株进行检测。结果13株布鲁氏菌标准株和6株疫苗株PCR检测结果均为阳性;沙门氏菌、大肠杆菌、葡萄球菌、结核杆菌和链球菌均为阴性;检测11株当地分离株,9株也为阳性,2株为阴性。PCR检测特异性为100%,敏感性为153fgDNA(相当于30个菌)。结论VirB8-PCR方法特异、敏感,能用于布鲁氏菌病的监测和致病力因子的检测。
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木地肤幼苗细胞膜透性和酶系统对盐胁迫的适应性研究
《草业科学 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：通过不同浓度的盐胁迫对木地肤Kochia prostrata幼苗细胞膜透性、丙二醛和3种保护酶活性的测定,获得以下结果:随着盐浓度的增加和胁迫时间的延长,幼苗叶片的细胞膜透性呈递增趋势,且浓度≥150mmol/L时,细胞膜透性与对照有极显著差异(P<0.01)。丙二醛含量随胁迫强度和时间的增加而增加,且浓度≥300 mmol/L时,丙二醛(MDA)含量迅速增加(P<0.05)。幼苗中超氧化物歧化酶(SOD)活性在400mmol/L处理下呈递减外,其它处理均呈先升后降趋势,且当质量分数≥200 mmol/L时,与对照差异显著(P<0.05);过氧化物酶(POD)活性变化比较缓和,仅在第25天与对照呈现极显著差异(P<0.01),且浓度<400 mmol/L时,POD活性与对照均无显著性差异(P>0.05);过氧化氢酶(CAT)活性变化趋势与SOD酶活性相似,呈先升后降的趋势。
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