科研产出
布鲁氏菌A19-△VirB12疫苗接种犊牛的免疫抗体变化
《中国奶牛 》 2024
摘要：为了解不同剂量的布鲁氏菌A19-△VirB12疫苗采用不同接种方式免疫犊牛的抗体变化,使用不同剂量的布鲁氏菌A19-△VirB12疫苗采用点眼和皮下接种两种方式免疫3~6月龄母犊牛,用试管凝集试验(SAT)检测采集于犊牛免疫各时段的血清中抗体变化.结果表明,首次试验中在免疫24周除点眼10亿组和皮下接种50亿组外的其他免疫组均能检出SAT阳性结果.第二次试验中皮下免疫50亿组在免疫3周的SAT检测阳性率达到84.21%,在免疫25周之后的SAT检测均为阴性;两个点眼免疫组在免疫12周初次检出持续抗体阳性,至免疫52周抗体阳性率为4.54%~9.09%.可以得出,布鲁氏菌A19-△VirB12疫苗大剂量免疫犊牛后可能会干扰后期布病检疫结果的判定,A19-△VirB12疫苗50亿CFU/mL皮下免疫犊牛后具有免疫原性较好和抗体转阴时间较早的优势.点眼免疫组检出抗体时间晚,现缺乏针对前期该疫苗细胞免疫指标的检测方法,需要进一步研究.
关键词： 布鲁氏菌病 布鲁氏菌A19-△VirB12疫苗 阳性率 抗体变化
全文链接
请求原文
布鲁氏菌病抗体检测方法的效果评价
《新疆畜牧业 》 2024
摘要：为了比较不同布鲁氏菌病抗体检测方法，应用RBT、c-ELISA和GICA分别对牛血清和牛奶各47份进行布病抗体检测，以SAT检测结果作为每种检测方法的“金”标准进行复核。结果显示：RBT、SAT和cELISA三种方法确定了阳性血清11份、阴性血清27份。应用c-ELISA和GICA对已知的血清进行检测，GICA 1和c-ELISA的敏感性、特异性和符合率均为100%,GICA 2的敏感性、特异性和符合率分别为100%、90%和92.1%,GICA 3的敏感性、特异性和符合率分别为100%、93.1%和94.7%。对47份临床血清进行检测，5种试剂盒检测方法的敏感性在68.8%～100%之间，特异性在87.8%～100%之间，符合率在89.4%～95.7%之间。GICA 1和GICA 2对47份牛奶的检测，GICA 1的敏感性、特异性和符合率分别为68.8%、100%和93.6%,GICA 2的敏感性、特异性和符合率分别是52.4%、100%和78.7%。该试验表明不同检测方法存在较大差异，为提升布病诊断水平提供参考。
全文链接
请求原文
布鲁氏菌利福平耐药株rpoB基因突变特征分析
《中华地方病学杂志 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：目的分析布鲁氏菌利福平耐药株rpoB基因的突变特征。方法选取分离自新疆维吾尔自治区的4株布鲁氏菌利福平耐药株（JSY-26、G-9、WSY-13、AW-3株）DNA, 采用PCR扩增利福平rpoB基因, 并对核苷酸序列进行测序。以布鲁氏菌利福平耐药标准株（RB51株）和利福平敏感株（ALT-8株）的rpoB基因序列为参照, 应用Mega 7.0软件比对分析4株布鲁氏菌利福平耐药株rpoB基因利福平耐药决定区（rifampicin resistance determination region, RRDR）内外的碱基突变位点及类型。结果经序列比对分析, JSY-26和WSY-13株均在rpoB基因RRDR 1 576 bp处发生单碱基点突变, 碱基由鸟嘌呤（guanine, G）突变为腺嘌呤（adenine, A）;G-9株在rpoB基因RRDR 1 606 bp处发生单碱基点突变, 碱基由胞嘧啶（cytosine, C）突变为A。AW-3株在rpoB基因RRDR外2 536、2 537、2 626、2 636、2 654 bp处出现3种类型共5处突变, 分别为插入突变3处[胸腺嘧啶（thymine, T）插入1次、C插入2次], 缺失突变1处（C缺失）, 单碱基点突变1处（由G突变为C）。结论布鲁氏菌利福平耐药株rpoB基因RRDR突变以单碱基点突变为主, RRDR外则出现多位点插入和缺失突变。
全文链接
请求原文
一起放牧羊群布鲁氏菌病的分析检测
《新疆农业科学 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：【目的】研究一起放牧羊群布鲁氏菌病（布病）分析检测方法适用性，为防治措施提供依据。【方法】采用RBT、GICA、SAT、MAT、FPA、iELISA、cELISA和PCR等方法检测90份来自流产羊群的血清样品，并从诊断方法的适用性特点、现场调查的结果进行统计分析。【结果】在90份羊血清样品中，RBT、GICA、SAT、MAT、FPA、iELISA、cELISA的阳性检出率分别为：8.89%（8/90）、12.22%（11/90）、17.78%（16/90）、14.44%（13/90）、21.11%（19/90）、25.56%（23/90）、24.44%（22/90）,PCR检测出14份阳性。【结论】初筛可选用RBT、GICA、FPA或iELISA等方法，确诊选用SAT、MAT或cELISA等方法。放牧羊群布病阳性率随年龄增加呈上升趋势（成年羊42%＞断奶羔羊2.5%）;雌性羊布病阳性率高于雄性（雌性29.68%＞雄性11.54%）,有流产史的羊群患布病的风险更高，成年雌性羊更易感染布鲁氏菌。检出阳性羊进行无害化处理，羊舍和周围环境进行彻底消毒，使用布病M5-90弱毒疫苗对阴性羊进行免疫，免疫2个月后允许交易和屠宰。
全文链接
请求原文
高敏荧光层析法在骆驼布鲁氏菌病流行病学调查中的应用
《中国人兽共患病学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：目的 了解新疆部分地区骆驼布鲁氏菌病（简称布病）流行情况，探索高敏荧光层析法在骆驼布病流行病学调查中的应用。方法 分别在新疆阿勒泰地区、塔城地区、和田地区、伊犁地区、博尔塔拉蒙古自治州采集骆驼血清2 000份，骆驼乳307份。应用布病虎红平板凝集试验（RBT）和试管凝集试验（SAT）进行骆驼布病血清学调查。提取骆驼乳基因组DNA,应用实时荧光PCR（Realtime-PCR）和AMOS-PCR方法进行病原学检测并分型。同时应用高敏荧光层析法对200份骆驼血清和100份骆驼乳样进行布病符合率检测。结果 新疆5个地区骆驼血清SAT确诊阳性31份，布病血清学阳性率为1.55%（31/2 000）。307份骆驼乳经Realtime-PCR检测，5份骆驼乳出现扩增曲线且Ct值在29.65～33.68,骆驼乳布鲁氏菌核酸阳性率为1.63%（5/307）。其中2份骆驼乳提取基因组DNA经AMOS-PCR扩增获得498 bp目的条带，测序并在NCBI进行BLAST比对分析，结果与牛种生物I型布鲁氏菌序列同源性在99.8%～100%。高敏荧光层析法检出骆驼布病阳性血清33份，阴性血清167份，该方法敏感性为96.77%,特异性为98.22%,与SAT检测方法总体符合率为98%,两种方法的Kappa值为0.925。高敏荧光层析法对100份骆驼乳检出布病抗体阳性乳7份，阴性乳93份，该方法与病原学检测方法（Realtime-PCR）总体符合率为98%。结论 布鲁氏菌高敏荧光层析法具有灵敏度和特异度高的优点，且与布病常规检测方法符合率较好，可用于骆驼布病现场快速检测。骆驼布病流行病学调查数据提示应加强骆驼布病防控，同时加强骆驼乳的食品安全监管。
全文链接
请求原文
布鲁氏菌病M5、S2疫苗免疫血清半抗原-琼脂扩散试验方法检测评价
《中国人兽共患病学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：目的 应用NH-AGID方法对布鲁氏菌M5、S2疫苗株免疫血清进行检测,评价该方法适用性.方法 选取3~5月龄羔羊74只,随机分为3组.分别以S2株1.0×1010 CFU、5.0×109 CFU灌服和皮下注射接种羔羊各25只,M5株以1.0 ×109CFU皮下注射接种羔羊24只.免疫后7 d~150 d采集羊全血,分离血清,经RBT初筛和SAT确诊免疫抗体阳性血清.评估NH-AGID方法对M5和S2株疫苗免疫抗体与感染抗体的鉴别诊断特异性.结果 NH-AGID方法对M5株疫苗免疫阳性血清的LPS抗体检出率为100%,NH抗体检出率8.3%~29.2%,鉴别诊断特异性为82.8%.对S2株疫苗口服组免疫阳性血清的LPS抗体检出率为31.2%~66.7%,NH抗体检出率为0%;皮下注射组免疫阳性血清的LPS抗体检出率为45.4%~100%,NH抗体检出率为4.5%~20%.对S2株疫苗免疫血清的鉴别诊断特异性为96.5%.结论 NH-AGID方法不完全适用于羊用布鲁氏菌疫苗M5株和S2株的鉴别诊断,该方法的鉴别诊断特异性与疫苗毒力、免疫剂量和途径等因素相关,应进一步研究明确该方法的适用范围及条件,以期合理应用于布病防控诊断工作中.
关键词： 布鲁氏菌病 半抗原-琼脂扩散试验 M5株 S2株 鉴别诊断
全文链接
请求原文
牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗在阿勒泰地区推广应用
《新疆畜牧业 》 2023
摘要：为了解牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗在阿勒泰地区牧业村免疫牛的安全性及免疫效果,分别在阿勒泰地区3个县选取6个牧业村,采用皮下注射方式5.0×1010 CFU免疫牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗,共免疫犊牛300头,在接种疫苗后第7d,观察并记录免疫牛的健康状况,并采集免疫后15 d、20 d、30 d、90d和180 d牛血清,按照国家标准规定布病虎红平板凝集和试管凝集试验,完成免疫抗体水平监测,对免疫后180d布病阳性血清,采用布病 iELISA鉴别诊断方法,区分标记疫苗免疫抗体与布病自然感染抗体.对免疫后3 d、7d以及15d牛采集阴道拭子并提取基因组DNA,应用实时荧光PCR(Realtime-PCR)方法,开展布病病原学检测.免疫后7 d犊牛均未出现不良反应,免疫抗体在15d达到最高,阳性率为98.36%,随后逐渐下降,免疫后180 d抗体阳性率为21.67%,阳性血清经iELISA方法检测,结果均为标记疫苗免疫抗体.免疫后3d、7d以及15d牛阴道拭子提取基因组DNA经Realtime-PCR检测均未检出布鲁氏菌阳性.牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗在阿勒泰地区不同县牧业村牛布病防控中安全、有效,同时具有鉴别诊断的优点,适用于牧业村推广应用,本研究为今后阿勒泰地区的布病防控提供了科学依据.
全文链接
请求原文
牛布鲁氏菌A19号疫苗免疫血清几种检测方法的比较
《中国动物检疫 》 2022
摘要：为选择科学适用的牛布鲁氏菌病净化检测方法,对1721份免疫布鲁氏菌A19号疫苗18个月后的牛血清,分别用虎红平板凝集试验(RBT)、试管凝集试验(SAT)、竞争酶联免疫吸附试验(cELISA)、间接酶联免疫吸附试验(iELISA)和荧光偏振试验(FPA)5种血清学检测方法,以及环介导等温扩增技术(LAMP)和荧光定量PCR病原学检测方法进行检测,分析比对不同检测方法的特异性、敏感性、误诊率、漏诊率、符合率、Kappa值等.结果显示:与SAT相比,其他4种血清学检测方法的敏感性、特异性和符合率从高到低依次为iELISA、FPA、cELISA、RBT,其中敏感性均在85.00%以上,特异性均在97.60%以上,符合率均在97.50%以上,Kappa值均≥1.00;与PCR相比,LAMP方法敏感性低(9.09%),但特异性强(99.65%),与PCR符合率高(98.49%).结果表明:血清学检测方法较为敏感特异,符合率和一致性均较高,而分子生物学检测方法特异性强,不易误诊和漏诊.因此,对于牛群的布鲁氏菌病净化,要结合牛群污染和免疫情况以及净化的不同阶段选择适用的检测方法,仅用一种方法可能会存在偏差.建议先用iELISA或FPA或RBT进行初筛,再用cELISA或SAT进行确诊,进而对确诊为阳性牛的阴道拭子或奶样进行分子生物学检测,以确定是否存在布鲁氏菌感染.本研究为免疫牛群的布鲁氏菌病净化检测方法选择提供了参考.
全文链接
请求原文
牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗双重实时荧光定量PCR方法的建立
《中国人兽共患病学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：目的 建立一种区分牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗株与布鲁氏菌野毒感染株的双重荧光定量PCR方法.方法 分别以布鲁氏菌4型分泌系统中VirB8基因、VirB12基因序列设计2对引物及探针,优化实时荧光PCR反应体系及条件.以牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗株、牛种布鲁氏菌A19疫苗株、羊种布鲁氏菌M5疫苗株以及猪种布鲁氏菌S2疫苗株、大肠杆菌、沙门氏菌基因组DNA进行Realtime-PCR扩增,评价该方法特异性.分别构建布鲁氏菌VirB12基因和VirB8基因片段阳性质粒,10倍系列稀释后进行Realtime-PCR扩增,测定该方法的敏感性.结果 本方法具有良好的特异性,牛种布鲁氏菌A19疫苗株、羊种布鲁氏菌M5疫苗株以及猪种布鲁氏菌S2疫苗株基因组DNA同时出现VirB8基因与VirB12基因阳性扩增,牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗株仅出现VirB8基因阳性扩增,大肠杆菌、沙门氏菌均未扩增出 目的条带,对VirB8基因及VirB12基因片段阳性质粒的检测限分别为约102copies/μL和103 copies/μL.该方法仅用于鉴别区分牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗株与布鲁氏菌野毒株.结论 本研究建立的布鲁氏菌双重Realtime-PCR方法,具有良好的特异性和敏感性,为今后鉴别牛种布鲁氏菌A19-△VirB12分子标记疫苗免疫牛与 自然感染牛提供技术支撑.
全文链接
请求原文
