科研产出
布鲁氏菌A19-△VirB12疫苗接种犊牛的免疫抗体变化
《中国奶牛 》 2024
摘要：为了解不同剂量的布鲁氏菌A19-△VirB12疫苗采用不同接种方式免疫犊牛的抗体变化,使用不同剂量的布鲁氏菌A19-△VirB12疫苗采用点眼和皮下接种两种方式免疫3~6月龄母犊牛,用试管凝集试验(SAT)检测采集于犊牛免疫各时段的血清中抗体变化.结果表明,首次试验中在免疫24周除点眼10亿组和皮下接种50亿组外的其他免疫组均能检出SAT阳性结果.第二次试验中皮下免疫50亿组在免疫3周的SAT检测阳性率达到84.21%,在免疫25周之后的SAT检测均为阴性;两个点眼免疫组在免疫12周初次检出持续抗体阳性,至免疫52周抗体阳性率为4.54%~9.09%.可以得出,布鲁氏菌A19-△VirB12疫苗大剂量免疫犊牛后可能会干扰后期布病检疫结果的判定,A19-△VirB12疫苗50亿CFU/mL皮下免疫犊牛后具有免疫原性较好和抗体转阴时间较早的优势.点眼免疫组检出抗体时间晚,现缺乏针对前期该疫苗细胞免疫指标的检测方法,需要进一步研究.
关键词： 布鲁氏菌病 布鲁氏菌A19-△VirB12疫苗 阳性率 抗体变化
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布鲁氏菌病抗体检测方法的效果评价
《新疆畜牧业 》 2024
摘要：为了比较不同布鲁氏菌病抗体检测方法，应用RBT、c-ELISA和GICA分别对牛血清和牛奶各47份进行布病抗体检测，以SAT检测结果作为每种检测方法的“金”标准进行复核。结果显示：RBT、SAT和cELISA三种方法确定了阳性血清11份、阴性血清27份。应用c-ELISA和GICA对已知的血清进行检测，GICA 1和c-ELISA的敏感性、特异性和符合率均为100%,GICA 2的敏感性、特异性和符合率分别为100%、90%和92.1%,GICA 3的敏感性、特异性和符合率分别为100%、93.1%和94.7%。对47份临床血清进行检测，5种试剂盒检测方法的敏感性在68.8%～100%之间，特异性在87.8%～100%之间，符合率在89.4%～95.7%之间。GICA 1和GICA 2对47份牛奶的检测，GICA 1的敏感性、特异性和符合率分别为68.8%、100%和93.6%,GICA 2的敏感性、特异性和符合率分别是52.4%、100%和78.7%。该试验表明不同检测方法存在较大差异，为提升布病诊断水平提供参考。
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布鲁氏菌利福平耐药株rpoB基因突变特征分析
《中华地方病学杂志 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：目的分析布鲁氏菌利福平耐药株rpoB基因的突变特征。方法选取分离自新疆维吾尔自治区的4株布鲁氏菌利福平耐药株（JSY-26、G-9、WSY-13、AW-3株）DNA, 采用PCR扩增利福平rpoB基因, 并对核苷酸序列进行测序。以布鲁氏菌利福平耐药标准株（RB51株）和利福平敏感株（ALT-8株）的rpoB基因序列为参照, 应用Mega 7.0软件比对分析4株布鲁氏菌利福平耐药株rpoB基因利福平耐药决定区（rifampicin resistance determination region, RRDR）内外的碱基突变位点及类型。结果经序列比对分析, JSY-26和WSY-13株均在rpoB基因RRDR 1 576 bp处发生单碱基点突变, 碱基由鸟嘌呤（guanine, G）突变为腺嘌呤（adenine, A）;G-9株在rpoB基因RRDR 1 606 bp处发生单碱基点突变, 碱基由胞嘧啶（cytosine, C）突变为A。AW-3株在rpoB基因RRDR外2 536、2 537、2 626、2 636、2 654 bp处出现3种类型共5处突变, 分别为插入突变3处[胸腺嘧啶（thymine, T）插入1次、C插入2次], 缺失突变1处（C缺失）, 单碱基点突变1处（由G突变为C）。结论布鲁氏菌利福平耐药株rpoB基因RRDR突变以单碱基点突变为主, RRDR外则出现多位点插入和缺失突变。
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牛羊布鲁氏菌天然半抗原琼脂扩散试验的建立与应用
《新疆农业科学 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：[目的]建立并优化布鲁氏菌天然半抗原琼脂扩散试验(Native hapten agar gel immuno-diffusion test,NH-AGID),检测临床样品.[方法]建立NH-AGID方法,评价方法特异性、敏感性及重复性;检测免疫地区2 287份、非免疫地区252份牛、羊血清.[结果]建立了 NH-AGID方法,检测稳定,重复性好,具有较高的特异性;对自然感染阳性动物检测敏感性低于80%,对排菌动物的检测敏感性高于90%,检出布病阳性抗体的阈值高于RBT.免疫地区血清NH抗体平均检出率17.8%,LPS抗体平均检出率52.3%;非免疫地区血清NH抗体平均检出率40.9%,LPS抗体平均检出率54.8%.[结论]应用NH-AGID方法可鉴别区分免疫地区牛、羊布病感染动物和免疫动物.检出NH抗体动物处于布鲁氏菌活动期或排菌期为布病感染动物,应及时剔除出群.
关键词： 布鲁氏菌病 半抗原-琼脂扩散试验 诊断
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三种布鲁氏菌病抗体检测方法的比较
《草食家畜 》 2024
摘要：【目的】旨在对酶联免疫吸附试验（i-ELISA)、竞争酶联免疫吸附试验（c-ELISA)和胶体金免疫层析法（GICA)用于检测布病抗体的敏感性、特异性和符合率进行比较。【方法】对实验室保存的40份牛血清样品，以布鲁氏菌病虎红平板凝集试验（RBT）、c-ELISA和国标推荐的布鲁氏菌病试管凝集试验（SAT）方法作为标准，确定布病的阳性和阴性样品。根据已确定的布病样品和40份样品的检测结果，对i-ELISA、c-ELISA和GICA与SAT的敏感性、特异性和符合率进行比较。【结果】对已确定的布病样品检测结果显示，c-ELISA与SAT的特异性和符合率均为100%;GICA 3的特异性和符合率最低，分别为91.4%和92.1%;i-ELISA、GICA 1、GICA 2和GICA 4的特异性和符合率均相同，分别为94.1%和94.7%。通过对40份血清样品的检测结果比较分析可知，RBT和4种GICA的敏感性较低，在66.7%～75%之间。【结论】c-ELISA的敏感性、特异性和符合率均为100%;4种GICA的敏感性较低，存在一定比列的假阳性和假阴性样品。
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布鲁氏菌A19和A19-△VirB12疫苗接种犊牛的免疫抗体变化比较
《中国奶牛 》 2024
摘要：为了解犊牛采用WOAH推荐的A19疫苗的免疫方式接种不同剂量的A19疫苗和A19-△VirB12疫苗的抗体变化，应用不同剂量的布鲁氏菌A19疫苗和A19-△VirB12疫苗采用WOAH推荐的黏膜免疫和皮下接种两种免疫方式接种3～6月龄母犊牛，采用试管凝集试验（SAT）检测采集于犊牛免疫各时段的血清中抗体变化。结果显示，试验一中犊牛皮下接种常规剂量A19疫苗和A19-△VirB12疫苗在免疫2周均会产生较高水平的抗体。在免疫24周两组仍有5%～15%的血清抗体效价维持在1:200以上。试验二中采用1/10常规剂量的A19疫苗和A19-△VirB12疫苗通过黏膜和皮下免疫犊牛，各组在免疫15周均出现较高水平的抗体效价，在免疫30周，两个皮下免疫组仍有11.76%的血清抗体效价维持在1:200以上。试验结果表明，犊牛皮下接种常规剂量A19-△VirB12疫苗与接种常规剂量A19疫苗产生的抗体效价水平相当。犊牛黏膜免疫和皮下免疫1/10剂量的A19-△VirB12疫苗与同一方法接种同一剂量A19疫苗产生的抗体效价水平相当。
关键词： 布鲁氏菌病 布鲁氏菌A19疫苗 布鲁氏菌A19-△VirB12疫苗 抗体变化
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一起放牧羊群布鲁氏菌病的分析检测
《新疆农业科学 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：【目的】研究一起放牧羊群布鲁氏菌病（布病）分析检测方法适用性，为防治措施提供依据。【方法】采用RBT、GICA、SAT、MAT、FPA、iELISA、cELISA和PCR等方法检测90份来自流产羊群的血清样品，并从诊断方法的适用性特点、现场调查的结果进行统计分析。【结果】在90份羊血清样品中，RBT、GICA、SAT、MAT、FPA、iELISA、cELISA的阳性检出率分别为：8.89%（8/90）、12.22%（11/90）、17.78%（16/90）、14.44%（13/90）、21.11%（19/90）、25.56%（23/90）、24.44%（22/90）,PCR检测出14份阳性。【结论】初筛可选用RBT、GICA、FPA或iELISA等方法，确诊选用SAT、MAT或cELISA等方法。放牧羊群布病阳性率随年龄增加呈上升趋势（成年羊42%＞断奶羔羊2.5%）;雌性羊布病阳性率高于雄性（雌性29.68%＞雄性11.54%）,有流产史的羊群患布病的风险更高，成年雌性羊更易感染布鲁氏菌。检出阳性羊进行无害化处理，羊舍和周围环境进行彻底消毒，使用布病M5-90弱毒疫苗对阴性羊进行免疫，免疫2个月后允许交易和屠宰。
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高敏荧光层析法在骆驼布鲁氏菌病流行病学调查中的应用
《中国人兽共患病学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：目的 了解新疆部分地区骆驼布鲁氏菌病（简称布病）流行情况，探索高敏荧光层析法在骆驼布病流行病学调查中的应用。方法 分别在新疆阿勒泰地区、塔城地区、和田地区、伊犁地区、博尔塔拉蒙古自治州采集骆驼血清2 000份，骆驼乳307份。应用布病虎红平板凝集试验（RBT）和试管凝集试验（SAT）进行骆驼布病血清学调查。提取骆驼乳基因组DNA,应用实时荧光PCR（Realtime-PCR）和AMOS-PCR方法进行病原学检测并分型。同时应用高敏荧光层析法对200份骆驼血清和100份骆驼乳样进行布病符合率检测。结果 新疆5个地区骆驼血清SAT确诊阳性31份，布病血清学阳性率为1.55%（31/2 000）。307份骆驼乳经Realtime-PCR检测，5份骆驼乳出现扩增曲线且Ct值在29.65～33.68,骆驼乳布鲁氏菌核酸阳性率为1.63%（5/307）。其中2份骆驼乳提取基因组DNA经AMOS-PCR扩增获得498 bp目的条带，测序并在NCBI进行BLAST比对分析，结果与牛种生物I型布鲁氏菌序列同源性在99.8%～100%。高敏荧光层析法检出骆驼布病阳性血清33份，阴性血清167份，该方法敏感性为96.77%,特异性为98.22%,与SAT检测方法总体符合率为98%,两种方法的Kappa值为0.925。高敏荧光层析法对100份骆驼乳检出布病抗体阳性乳7份，阴性乳93份，该方法与病原学检测方法（Realtime-PCR）总体符合率为98%。结论 布鲁氏菌高敏荧光层析法具有灵敏度和特异度高的优点，且与布病常规检测方法符合率较好，可用于骆驼布病现场快速检测。骆驼布病流行病学调查数据提示应加强骆驼布病防控，同时加强骆驼乳的食品安全监管。
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布鲁氏菌病M5、S2疫苗免疫血清半抗原-琼脂扩散试验方法检测评价
《中国人兽共患病学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：目的 应用NH-AGID方法对布鲁氏菌M5、S2疫苗株免疫血清进行检测,评价该方法适用性.方法 选取3~5月龄羔羊74只,随机分为3组.分别以S2株1.0×1010 CFU、5.0×109 CFU灌服和皮下注射接种羔羊各25只,M5株以1.0 ×109CFU皮下注射接种羔羊24只.免疫后7 d~150 d采集羊全血,分离血清,经RBT初筛和SAT确诊免疫抗体阳性血清.评估NH-AGID方法对M5和S2株疫苗免疫抗体与感染抗体的鉴别诊断特异性.结果 NH-AGID方法对M5株疫苗免疫阳性血清的LPS抗体检出率为100%,NH抗体检出率8.3%~29.2%,鉴别诊断特异性为82.8%.对S2株疫苗口服组免疫阳性血清的LPS抗体检出率为31.2%~66.7%,NH抗体检出率为0%;皮下注射组免疫阳性血清的LPS抗体检出率为45.4%~100%,NH抗体检出率为4.5%~20%.对S2株疫苗免疫血清的鉴别诊断特异性为96.5%.结论 NH-AGID方法不完全适用于羊用布鲁氏菌疫苗M5株和S2株的鉴别诊断,该方法的鉴别诊断特异性与疫苗毒力、免疫剂量和途径等因素相关,应进一步研究明确该方法的适用范围及条件,以期合理应用于布病防控诊断工作中.
关键词： 布鲁氏菌病 半抗原-琼脂扩散试验 M5株 S2株 鉴别诊断
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牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗在阿勒泰地区推广应用
《新疆畜牧业 》 2023
摘要：为了解牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗在阿勒泰地区牧业村免疫牛的安全性及免疫效果,分别在阿勒泰地区3个县选取6个牧业村,采用皮下注射方式5.0×1010 CFU免疫牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗,共免疫犊牛300头,在接种疫苗后第7d,观察并记录免疫牛的健康状况,并采集免疫后15 d、20 d、30 d、90d和180 d牛血清,按照国家标准规定布病虎红平板凝集和试管凝集试验,完成免疫抗体水平监测,对免疫后180d布病阳性血清,采用布病 iELISA鉴别诊断方法,区分标记疫苗免疫抗体与布病自然感染抗体.对免疫后3 d、7d以及15d牛采集阴道拭子并提取基因组DNA,应用实时荧光PCR(Realtime-PCR)方法,开展布病病原学检测.免疫后7 d犊牛均未出现不良反应,免疫抗体在15d达到最高,阳性率为98.36%,随后逐渐下降,免疫后180 d抗体阳性率为21.67%,阳性血清经iELISA方法检测,结果均为标记疫苗免疫抗体.免疫后3d、7d以及15d牛阴道拭子提取基因组DNA经Realtime-PCR检测均未检出布鲁氏菌阳性.牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗在阿勒泰地区不同县牧业村牛布病防控中安全、有效,同时具有鉴别诊断的优点,适用于牧业村推广应用,本研究为今后阿勒泰地区的布病防控提供了科学依据.
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