科研产出
布鲁氏菌VirB8-PCR方法的建立
《中国人兽共患病学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：目的建立VirB8-PCR方法,用于布鲁氏菌病的诊断和致病力因子的检测。方法以布鲁氏菌病致病力因子——四型分泌系统中的VirB8基因为模板,设计引物,建立VirB8-PCR方法,优化反应条件和程序,对布鲁氏菌标准株、疫苗株和当地分离株进行检测。结果13株布鲁氏菌标准株和6株疫苗株PCR检测结果均为阳性;沙门氏菌、大肠杆菌、葡萄球菌、结核杆菌和链球菌均为阴性;检测11株当地分离株,9株也为阳性,2株为阴性。PCR检测特异性为100%,敏感性为153fgDNA(相当于30个菌)。结论VirB8-PCR方法特异、敏感,能用于布鲁氏菌病的监测和致病力因子的检测。
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牛布鲁氏杆菌斑点酶联快速诊断新技术的研究
《地方病通报 》 2008
摘要：目的建立一种快速诊断牛布鲁氏杆菌病抗原的新方法。方法应用斑点酶联免疫吸附试验原理,将牛布鲁氏杆菌单克隆抗体与待检样品集成于一张纤维素膜上,与酶标二抗反应,再与底物液作用,通过肉眼观察底物液的颜色变化来判断待检样品中是否含有布鲁氏杆菌。结果该方法最低检测样品中活菌数为1万个菌落形成单位,整个检测过程需4.5个小时。结论牛布鲁氏杆菌斑点酶联快速诊断技术是一种简单、易行、特异(与标准大肠杆菌、沙门氏杆菌菌株没有交叉反应)、敏感(检测1万个单个菌)、省时(整个过程只需4.5个小时)的检测牛布鲁氏杆菌菌体的新方法,便于各级检验部门和基层广大农村牧区推广和应用。
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3株牛布鲁氏菌19疫苗株赤藓醇代谢基因的克隆与序列分析
《新疆农业大学学报 》 2008 北大核心
摘要：对3株(国际标准参考株S19,中国天康疫苗株A19-1,中国中监所标准株A19-2)不同来源布鲁氏菌19疫苗株的赤藓醇代谢基因(Erythritol catabolic gene,简写Ery)进行克隆与序列分析。参照GenBank中布鲁氏菌牛种2308的赤藓醇代谢基因序列,设计一对特异性引物,用PCR方法扩增3株19疫苗株Ery基因,对PCR产物进行克隆、测序分析。与2308比较,S19的Ery基因缺失702碱基,两株中国来源的A19不缺失,但阅读框的51,52位CG变为GC,521,522,523缺失AGG,547位T变为C。引起的氨基酸变化有,13位R变为A,170位T变为A,178位V变为A。赤藓醇代谢基因的克隆测序结果表明,我国的两株A19均不缺失702个碱基,但有3处发生点突变,引起3个氨基酸发生变化。
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布鲁菌病研究进展
《动物医学进展 》 2007
摘要：布鲁菌病是目前世界上流行最广、危害最大的人兽共患病之一,在全世界170多个国家和地区有人、畜布鲁菌病存在和流行。我国25个省(市、区)有人、畜布鲁菌病存在和流行。随着畜牧业的快速发展,布鲁菌病在多数疫区明显有回升趋势。2005年全国新发病19 664人,发病率为1.504/10万,超过历史最高记录。布鲁菌是细胞内寄生的革兰氏阴性菌,主要引起人的波状热和慢性感染以及动物睾丸炎和流产等,直接危害公共安全,造成严重的经济损失。近年来从多种海洋哺乳动物(海豹、海豚、鲸等)中也分离出布鲁菌。通过DNA同源性比较,发现海洋与陆地哺乳动物布鲁菌DNA的同源性高达90%以上。随着分子生物学的发展,对布鲁菌分子结构的研究不断获得新的发现,为进一步认识和控制布鲁菌病提供了可能。文章从布鲁菌病流行的历史与现状、布鲁菌的抗原分子生物特性、布鲁菌病的检测方法和布鲁菌病疫苗的现状等方面对布鲁菌病的研究进展做了介绍。
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用AMOS-PCR对布鲁氏菌种型鉴定的研究
《中国人兽共患病学报 》 2007 北大核心 CSCD
摘要：目的寻找一种快速诊断布鲁氏菌病的方法,并且用这种方法鉴别布鲁氏菌的种和部分型。方法根据布鲁氏菌IS711插入序列及相邻单染色体DNA种的不同,设计引物,建立AMOS-PCR方法,用于诊断布鲁氏菌病,并鉴定种。结果在检测的75份样品中,PCR检出14份阳性;细菌分离与PCR诊断的符合率为50%;在SAT为阳性的情况下,PCR检出阳性率为41.18%;有1份样品分菌和SAT检测结果均为阴性,而PCR结果为阳性。结论AMOS-PCR是一种快速、简便、准确的布病诊断方法,并能鉴定布鲁氏菌的种,区分疫苗(S19)株和野毒株。
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几种布鲁氏菌病血清学诊断方法的比较研究
《中国动物检疫 》 2006 北大核心
摘要：疑似布病感染的牛场采集牛奶和全血进行细菌分离,采集血清用虎红平板凝集试验(RBT)、试管凝集试验(SAT)、iELISA、cELISA进行抗体检测;采集免疫牛场和部分免疫羊场血清430份进行国内4个厂家生产的RBT抗原比对实验,并且选择特异性最高厂家的RBT抗原与SAT、iELISA和cELISA同时进行抗体检测。结果表明4个厂家生产的RBT抗原检测结果的一致性较差,RBT和SAT与加拿大布病参考实验室提供的iELISA和cELISA试剂盒检测结果相比一致率较高,但前两者均有较高的假阳性和假阴性。通过对比试验得出:在布病检疫时可选择特异性好的RBT抗原进行初筛,阳性结果用iELISA或cELISA进行确诊。
关键词： 布鲁氏菌病 iELISA cELISA SAT RBT
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抗牛布鲁氏菌独特型抗体杂交瘤细胞(F9)的生长和代谢
《中国预防兽医学报 》 2001 北大核心 CSCD
摘要：用RPMI16 40培养基对抗牛布鲁氏菌独特型抗体杂交瘤细胞株 (F9)进行培养 ,并对其生长代谢进行测定。该细胞不论接种 1.1× 10 5cells/ml还是 2 .2× 10 5cells/ml,其增殖最高倍数只能达 2～ 3倍 (3.2 2× 10 5cells/ml/ 48h和 3.7× 10 5cells/ml/2 4h)量 ,葡萄糖在 48～ 72小时内全部耗尽 ,共产生大量乳酸 ,随着葡萄糖的耗竭 ,碳源的消失 ,乳酸的积累 ,培养液pH急剧下降 ,致使细胞活力受到很大影响 ,细胞几乎无维持期就快速死亡。
关键词： F9杂交瘤细胞 生长与代谢 抗独特型抗体 牛布鲁氏菌病
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牛布氏杆菌抗独特型杂交瘤细胞的悬浮培养研究
《中国生物制品学杂志 》 1997
摘要：牛布氏杆菌抗独特型杂交瘤细胞F9株能稳定地分泌高效价的抗独特型抗体，其Ig类型为IgG2a，并具有抗原“内影象”和良好的免疫原性。该细胞培养在Techne－T104型1．5L细胞培养装置中，最适连续培养条件是pH7．1～7．5；36．5±0．5℃，搅拌速度35～45r／min。在连续悬浮培养时，细胞密度维持在3．2×105～8．2×105／ml，单克隆抗独特型抗体浓度可达1．04mg／ml，培养上清ELISA捕获法效价达1：160。
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布鲁氏菌抗独特型抗体的研究
《微生物学报 》 1993 北大核心 CSCD
摘要：在建立布鲁氏菌单克隆抗体细胞株的基础上,筛选具有保护作用的单抗 A7免疫家免制备抗独特型抗体(简称二抗)。经阻断试验和竞争抑制试验证实,该二抗具有抗原"内影象"。将其提纯后配制成甘油佐剂苗免疫豚鼠和小白鼠,检测结果表明:免疫豚鼠和小白鼠产生了布鲁氏菌凝集抗体;免疫小鼠的循环 T ANAE~+细胞百分数明显高于对照组;免疫豚鼠在免疫后4个月时强毒菌株攻击有79.2%获得保护。因此认为,该二抗不仅具有抗原的"内影象"结构,而且具有良好的免疫原性,可供作疫苗用。
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抗牛布氏杆菌病独特型抗体苗的研究
《草食家畜 》 1993 北大核心
摘要：众所周知,布鲁氏菌病是一种人畜共患传染病,近年来,羊布鲁氏菌病已得到控制,牛布鲁氏菌病日趋严重,尤在新疆更为突出。据了解,有些牛场发病率竟高达33％以上。为了尽快控制本病,我们在已研制的牛种544A布鲁氏菌单克隆抗体基础上,又将新疆本地分离到的布病牛强毒S_(85A)研制成单克隆抗体,并选出ELISA高效价的中和性单克隆抗体-A_7,免疫家兔。经纯化,加入不同佐剂,配制成抗独特型苗,免疫杂种牛和土种黄牛。通过平板凝集,试管凝集和Coomb’s试验,证明凝集抗体消失很快,不完全抗体则可维持一年以上,表明抗布氏杆菌性抗体在体内存在时间较长,免疫持续期达9个月以上。这为抗独特型抗体苗的应用提供了依据。
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