科研产出
牛结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的原核表达和纯化
《草食家畜 》 2010
摘要：构建牛结核分枝杆菌ESAT-6基因的原核表达载体,诱导表达、纯化并初步鉴定该蛋白。方法:以牛型分枝杆菌基因组DNA为模板,PCR方法扩增ESAT-6基因,产物通过双酶切克隆入pET-22b(+)质粒,经PCR、酶切、测序等方法鉴定后,转入大肠杆菌BL21(DE3)polys菌体,经IPTG诱导表达蛋白;利用Western-blot鉴定重组蛋白后,纯化目的蛋白。结果:所获得ESAT-6基因序列与GenBank公布的完全一致。经SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定均发现在6kDa处有特异性蛋白条带。纯化的蛋白的大小与蛋白质分子量标准比较一致。结论:成功表达纯化并鉴定构建了ESAT-6融合蛋白。
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拒盐型盐生植物小花碱茅肌动蛋白基因片段的克隆及序列分析
《基因组学与应用生物学 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：本研究根据其它植物Actin基因的保守序列设计一对简并性引物,以拒盐型盐生植物小花碱茅根部总RNA为模板,采用RT-PCR的方法扩增出Actin基因片段并克隆到PUCm-T载体,阳性克隆经PCR检测后进行测序,在GenBank中注册;序列分析结果表明:该片段长约600bp,编码198个氨基酸;所得序列与GenBank中注册的其它植物Actin基因序列同源性均在84%以上,与其它肌动蛋白的氨基酸序列同源性达94%以上。
IPTG诱导浓度、时间对AsiaⅠ型口蹄疫病毒VP1蛋白表达的影响
《中国畜牧兽医 》 2009 北大核心
摘要：将口蹄疫病毒VP1基因插入原核表达载体pET-28a中,转化至大肠杆菌BL21。用不同的IPTG浓度与不同诱导时间诱导菌株表达VP1蛋白,分析不同IPTG浓度及不同诱导时间对蛋白表达量的影响,以确定最佳表达条件。结果表明,在一定范围内,随IPTG浓度的增高,表达量并不会随之增大;而在菌体对数生长期内,随诱导时间的延长,表达量会随之增大。最后确定当IPTG浓度为3 mmol/L,诱导表达到最长时间9 h时,VP1蛋白表达量最大。
关键词： 口蹄疫病毒 AsiaⅠ型 VP1蛋白 表达 IPTG 诱导浓度 诱导时间
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新城疫病毒分离株F基因的克隆与序列分析
《动物医学进展 》 2009 北大核心
摘要：应用RT-PCR分别扩增出新城疫病毒(NDV)青海株(QH3)、黑龙江株(HLJ)和甘肃株(A4)的融合蛋白(F)基因的全长核苷酸,再克隆到pMD18-T载体中。经酶切和质粒PCR鉴定,获得阳性重组质粒后,进行序列测定并推导出其氨基酸序列,同时进行分析和比较。序列分析结果表明,所获得的3个分离株F基因完整的开放阅读框长度为1662bp,共编码F蛋白的553个氨基酸;3个毒株之间的核苷酸序列同源性为88.0%～90.6%;与常用疫苗株之间核苷酸序列同源性只有85.3%～91.6%。三者F基因的裂解位点均为112R-R-Q-K/R-R-F117,符合强毒株裂解区氨基酸组成的特征。以1bp～374bp的核苷酸序列绘制系统发育树分析表明,QH3株NDV为基因Ⅷ型,A4株NDV为基因Ⅵ型,HLJ株NDV为基因Ⅸ型。
鹅源H5N1亚型禽流感病毒新疆株HA基因的克隆和序列分析
《全国人畜共患病学术研讨会论文集 》 2006 CSCD
摘要：根据已发表的H5N1亚型禽流感病毒的血凝素(HA)基因序列,设计并合成了1对引物,利用RT-PCR方法扩增出鹅源H5N1亚型禽流感病毒新疆株A/Goose/XJYL/10/2003(H5N1)HA基因,然后将其克隆到pMD18-T载体上,获得了全长为1758bp的HA全基因序列,其氨基酸切割位点附近具有碱性氨基酸插入,具备了高致病性禽流感病毒的特征。利用DNA分析软件,与GenBank中已发表的同一亚型禽流感病毒HA基因的参考进行比较分析表明,本试验株与香港、广东、广西、浙江等南方地区2000-2004年间的H5N1禽流感毒株HA基因核甘酸序列同源性在98.0%-98.7%之间,的H5N1禽流...
H5N1亚型禽流感病毒新疆株NS基因的克隆和序列分析
《中国兽医科技 》 2005 北大核心 CSCD
摘要：根据已发表的H5N1禽流感病毒NS基因全序列设计了1对引物,对4株禽流感病毒新疆株的NS基因进行了RT-PCR扩增,并将其克隆到pMD 18-T载体上,分别获得了全长为817、851、8548、54 bp的全基因序列。序列分析结果表明,新疆毒株间的核苷酸同源性为97.8%~98.9%,氨基酸同源性为96.5%~98.7%,与广东、香港和东南亚等不同地区的11个毒株比较,同源性为90.0%~99.4%;与来自野禽、猪等不同种类的11个流感毒株比较,同源性为81.4%~99.3%。系统进化树分析表明,新疆株独立分支。
