文献类型： 中文期刊

作者： 蒋倩 ¹ ; 闵芳 ¹ ; 马志刚 ¹ ; 梁宇萌 ¹ ; 陶芯宇 ¹ ; 丁晓军 ¹ ; 李添庆 ¹ ; 钟旗 ² ; 姚刚 ¹ ; 马雪连 ¹ ;

作者机构： 1.新疆农业大学动物医学学院新疆草食动物新药研究与创制重点实验室

2.新疆畜牧科学院动物科学研究所

关键词： 牛冠状病毒;N蛋白;亚单位疫苗;小鼠;免疫原性

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2024 年 44 卷 012 期

页码： 2540-2548

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 牛冠状病毒（bovine coronavirus, BCoV）可引起新生犊牛腹泻和呼吸道疾病，严重时可导致犊牛死亡，给养牛业造成巨大的经济损失。目前我国尚未有自主研发的针对BCoV的疫苗，导致BCoV流行性高、传播范围广，因此开发具有保护性BCoV的疫苗是当务之急。本研究旨在表达BCoV N蛋白并分析其免疫原性，首先用PCR方法扩增N蛋白基因，构建pET-30a-N重组质粒，表达并纯化N蛋白，再将N蛋白与佐剂配伍免疫小鼠；采用间接ELISA检测小鼠IgG和IgA抗体水平及滴度，利用流式细胞术检测小鼠脾脏T淋巴细胞分群比例以及相关免疫细胞因子的释放情况。结果显示，成功获得BCoV可溶性N蛋白，大小约为55 kDa; ELISA检测结果显示，免疫组小鼠血清IgG抗体效价为1∶51 200,免疫组小鼠血清IgA抗体效价为1∶3 200;流式细胞术检测结果显示，与对照组相比，免疫组CD4⁺/CD8⁺ T淋巴细胞亚群比例极显著升高（P<0.01）,TNF-α释放显著增多（P<0.05）,产生偏向辅助性T细胞增加和TNF-α分泌增多的细胞免疫应答。研究表明，通过原核表达系统能成功实现BCoV N蛋白的可溶性表达，且获得的BCoV N蛋白免疫原性良好，可诱导免疫小鼠产生强烈的体液免疫和细胞免疫反应。为开发安全有效的BCoV亚单位疫苗提供了重要的技术支持。