畜禽动物中长链非编码RNA的研究现状

戴梦红; 陆启荣; 程古月; 李丽; 刘孟轲; 郝海红; 王旭; 袁宗辉; 《畜牧兽医学报 》 2016 北大核心 CSCD

摘要：长链非编码RNA(Long noncoding RNAs,lncRNA)是一类转录本长度超过200nt的非编码RNA分子,它们以RNA的形式在表观遗传调控、转录调控以及转录后调控等多层面调控基因的表达。它们参与细胞增殖、分化和凋亡等多种生物学过程。近年来,lncRNA在畜禽动物中的研究越来越受到人们的重视,人们发现lncRNA在动物生长发育中扮演着很重要的角色。本文对近十五年来畜禽动物如猪、鸡、羊和牛中lncRNA的高通量筛选与鉴定、表达、在不同物种中的进化以及功能等研究现状进行综述。

关键词： LncRNA 畜禽动物 高通量筛选 表达 进化 功能

 全文链接 请求原文

铜绿假单胞菌外毒素A基因的克隆与原核表达

吴建勇; 王登峰; 杨学云; 李建军; 王治才; 《草食家畜 》 2013

摘要：为建立铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)外毒素A(Exotoxin A,ETA)的原核表达方法,采用PCR技术扩eta基因,将其插入pET-28a载体构建重组质粒pET-28a-eta,并对重组质粒进行双酶切、PCR及测序鉴定。转入BL21(DE3)中诱导表达,检测目的蛋白大小及反应原性,然后进行表达条件的优化及其表达形式检测。结果表明,所扩增eta基因大小为1917 bp,与GeneBank参比序列一致性在98.70%;蛋白分析表明,rETA大小为74 KDa,具有和天然毒素相似的反应原性。目的基因在37℃、0.6 mmol/LIPTG诱导3 h获得最佳表达。该蛋白在超声波裂解上清和包涵体中均有分布,但主要以包涵体为主。该研究为进一步开展ETA的批量纯化提供了前提条件。

关键词： 铜绿假单胞菌 外毒素A 克隆 表达

 全文链接 请求原文

靶向口蹄疫病毒shRNA表达载体转染后特异性siRNA的分子检测

蔡扩军; 孟庆玲; 乔军; 陈创夫; 马饰委; 黄炯; 张再超; 田振中; 杨丽红; 《中国兽医学报 》 2013 北大核心 CSCD

摘要：通过Poly A polymerase对小干扰RNA分子(Small interfering RNA,siRNA)3′端进行加"Poly A"处理,然后进行RT-PCR扩增,并将扩增产物克隆到T载体上进行测序。结果表明,通过该方法可以快速检测FMDV特异性siRNA分子的表达,这为siRNA的干扰FMDV复制分子机制和抗FMDV转基因动物细胞水平的评价研究提供了技术支撑。

关键词： siRNA 表达 反转录PCR 口蹄疫病毒

 全文链接 请求原文

D型产气荚膜梭菌α毒素基因的克隆与高效表达

李娜; 吴建勇; 李建军; 杨学云; 王登峰; 段新华; 王治才; 《中国畜牧兽医 》 2012 北大核心

摘要：为建立产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)α毒素(cpa)克隆表达方法,应用PCR方法从羊源D型产气荚膜梭菌中扩增cpa成熟肽基因序列,将其插入pET-28b载体中,构建重组表达载体pET-28b-cpa;通过PCR扩增、双酶切和测序方法对重组载体进行鉴定及序列分析,然后转入BL21(DE3)pLysS中诱导表达;用SDS-PAGE检测目的蛋白大小及分布,Western blotting方法检测其反应原性。结果表明,所扩增的cpa基因大小为1110 bp,与GenBank参考序列同源性为99%以上;SDS-PAGE分析结果表明,目的蛋白大小为41.2 ku,与预期大小一致,在超声波裂解上清和包涵体中均有分布,但主要以包涵体为主,两者分布均具有和天然毒素相似的反应原性。

关键词： 产气荚膜梭菌 α毒素 克隆 表达

 全文链接 请求原文

口蹄疫病毒非结构蛋白3AB、3A基因的克隆与原核表达

张先锋; 易忠; 魏玉荣; 胡尔玛西; 符子华; 《新疆农业大学学报 》 2010 北大核心

摘要：以构建的口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC质粒pGEM-T-3ABC为模板,设计了特异性的引物,进行RT-PCR扩增得到非结构蛋白3AB、3A基因,然后分别定向克隆到原核表达载体pET-28a、pET-41a载体上,将重组质粒转化宿主菌BL21,IPTG诱导表达目的蛋白。表达产物经SDS-PAGE和Western blotting检测,证明重组蛋白在大肠杆菌中成功表达。

关键词： 口蹄疫病毒 非结构蛋白 克隆 表达

 全文链接 请求原文

口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC基因的克隆与原核表达

张先锋; 易忠; 魏玉荣; 符子华; 胡尔玛西; 《草食家畜 》 2010

摘要：以亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)为研究对象,通过逆转录并进行PCR扩增得到非结构蛋白3ABC基因,然后定向克隆到原核表达载体PET-32a,重组质粒PET-3abc转化宿主菌BL21,IPTG诱导表达目的蛋白。表达产物经SDS-PAGE检测,证明重组蛋白PET-32a-3ABC成功在大肠杆菌中表达。以表达产物作为抗原,为鉴别诊断自然感染和免疫动物的方法提供了技术条件。

关键词： 口蹄疫病毒 非结构蛋白 克隆 表达

 全文链接 请求原文

牛结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的原核表达和纯化

徐志光; 许礼义; 呼西旦; 宋振忠; 徐敏; 《草食家畜 》 2010

摘要：构建牛结核分枝杆菌ESAT-6基因的原核表达载体,诱导表达、纯化并初步鉴定该蛋白。方法:以牛型分枝杆菌基因组DNA为模板,PCR方法扩增ESAT-6基因,产物通过双酶切克隆入pET-22b(+)质粒,经PCR、酶切、测序等方法鉴定后,转入大肠杆菌BL21(DE3)polys菌体,经IPTG诱导表达蛋白;利用Western-blot鉴定重组蛋白后,纯化目的蛋白。结果:所获得ESAT-6基因序列与GenBank公布的完全一致。经SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定均发现在6kDa处有特异性蛋白条带。纯化的蛋白的大小与蛋白质分子量标准比较一致。结论:成功表达纯化并鉴定构建了ESAT-6融合蛋白。

关键词： 牛分枝杆菌 ESAT-6 表达 纯化

 全文链接 请求原文

IPTG诱导浓度、时间对AsiaⅠ型口蹄疫病毒VP1蛋白表达的影响

魏婕; 易忠; 魏玉荣; 王海烽; 胡尔玛西; 符子华; 冉多良; 《中国畜牧兽医 》 2009 北大核心

摘要：将口蹄疫病毒VP1基因插入原核表达载体pET-28a中,转化至大肠杆菌BL21。用不同的IPTG浓度与不同诱导时间诱导菌株表达VP1蛋白,分析不同IPTG浓度及不同诱导时间对蛋白表达量的影响,以确定最佳表达条件。结果表明,在一定范围内,随IPTG浓度的增高,表达量并不会随之增大;而在菌体对数生长期内,随诱导时间的延长,表达量会随之增大。最后确定当IPTG浓度为3 mmol/L,诱导表达到最长时间9 h时,VP1蛋白表达量最大。

关键词： 口蹄疫病毒 AsiaⅠ型 VP1蛋白 表达 IPTG 诱导浓度 诱导时间

 全文链接 请求原文

犬抗细粒棘球绦虫疫苗候选蛋白EgM9的原核表达及纯化

古努尔·吐尔逊; 郭宝平; 张壮志; 赵莉; 石保新; 吐尔洪·依米提; 哈斯也提·艾力; 王进成; 米小云; 刘斌; 张文宝; 《中国动物传染病学报 》 2009

摘要：把含有EgM9基因的质粒pET-41b转化至大肠杆菌BL-21中,IPTG诱导重组质粒的表达,亲和层析纯化表达产物,用SDS-PAGE和Western blot进行分析鉴定,显示分离纯化的EgM9和GST蛋白纯度较高,1L的培养物约可以得到5mg纯化蛋白,分子量为60kDa。EgM9免疫后的血清与成熟虫体蛋白有特异性反应。融合蛋白获得高效表达,并成功纯化,初步实验证明EgM9具有良好的免疫原性,可进一步用于疫苗的免疫实验。

关键词： 细粒棘球绦虫 EgM9 疫苗候选蛋白 表达

 全文链接 请求原文

羊BLG基因5′和3′调控区克隆及其调控GFP基因在乳腺细胞的表达

刘明军; 李文蓉; 武坚; 黄俊成; 郭志勤; 曲新勇; Paul Kroon; 《生物工程学报 》 2002 北大核心 CSCD

关键词： 羊乳球蛋白 基因克隆 绿色荧光蛋白 乳腺细胞系 表达

 全文链接 请求原文