科研产出
蓝舌病新疆分离株VP7蛋白编码基因序列分析及一步法RT-PCR方法的建立
《新疆农业科学 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：【目的】分析蓝舌病新疆分离株编码VP7蛋白S7基因保守序列，建立蓝舌病新疆分离株一步法RT-PCR方法，为新疆BTV分子流行病学调查及防控提供技术支持。【方法】采用二代测序技术获得新疆分离株S7基因序列，登陆GenBank对序列进行同源性Blast比对，用软件MEGA 5.0分析序列差异，根据蓝舌病新疆分离株编码VP7蛋白S7基因保守序列，运用软件Oligo6.0设计引物，对蓝舌病新疆分离株S7基因进行RT-PCR扩增，并验证该方法的特异性及敏感性。【结果】蓝舌病中国新疆分离株编码VP7蛋白S7基因序列与哈尔滨报道BTV分离株S7基因片段相似度较高为89.64%,与中国云南报道BTV-29型分离株、蒙古国BTV分离株S7基因片段相似度分别为87.49%和87.39%;与德国BTV分离株S7基因片段相似度为80.70%,其余均无同源性序列。中国新疆分离株S7基因片段序列与4条同源序列间存在26处核苷酸差异，9处氨基酸差异。【结论】建立的蓝舌病中国新疆分离株S7基因片段一步法RT-PCR方法具有良好的特异性，仅BTV中国新疆分离株扩增获得目的条带，该方法的敏感性为4.0×103 copies/mL。
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不同毛色巴什拜羊皮肤组织中10个候选基因表达水平分析
《中国草食动物科学 》 2024 北大核心
摘要：为探讨可能影响动物毛色的10个候选基因（TCF25、TYR、TYRP1、ASIP、KIT、MITF、EDNRB、SLC7A11、MC1R和DCT）与巴什拜羊毛色的关系，利用实时荧光定量PCR技术对30只1周岁不同毛色（棕色、白色和黑色各10只）被毛的巴什拜羊皮肤组织中与毛色相关基因的mRNA表达量进行了研究，所有数据使用SPSS 23.0进行单因素方差分析。结果显示，在不同毛色被毛巴什拜羊皮肤中，TCF25、ASIP和EDNRB基因在白色被毛皮肤中的表达量均显著高于黑色和棕色被毛皮肤（P ＜0.05）;TYR、TYRP1、DCT和MC1R基因在黑色被毛皮肤中的表达量均显著高于白色和棕色被毛皮肤（P ＜0.05）;MITF基因在棕色被毛皮肤中的表达量显著高于白色和黑色被毛皮肤（P ＜0.05），而KIT和SLC7A11基因在不同毛色皮肤组织中均无显著差异（P＞ 0.05）。综上可知，TCF25和ASIP基因主要与巴什拜羊白色被毛性状相关，TYR、TYRP1、DCT和MC1R主要与巴什拜羊黑色被毛性状相关，而MITF和EDNRB基因参与调控巴什拜羊棕色和白色被毛性状的具体作用机制还有待进一步探究。
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鉴别蓝舌病病毒血清29型RT-PCR与qRT-PCR方法的建立与应用
《中国兽医科学 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：为建立快速鉴别蓝舌病病毒血清29型(BTV-29)的方法,根据BTV-29型毒株基因节段2(Seg-2)的序列特征,分别设计用于RT-PCR与q RT-PCR方法的特异性引物与Taq Man探针,通过试验确定其敏感性,用BTV-1～BTV-24等核酸作为对照评价其特异性。对BTV-29感染动物血液样本中的病毒核酸进行监测,并用BTV群特异q RT-PCR方法验证其可靠性。结果显示,建立的BTV-29特异RT-PCR的灵敏度是1.12×10~2 copies/μL,而BTV-29特异q RT-PCR的灵敏度是1.12×10~1 copies/μL,均与BTV-1～BTV-24、流行性出血病病毒、帕利亚姆病毒和阿卡斑病毒之间无交叉反应;用BTV-29特异q RT-PCR检测BTV-29型感染山羊血液中的BTV-29核酸的动态变化,结果与BTV群特异q RT-PCR检测结果基本一致。本研究建立的BTV-29特异RT-PCR和q RT-PCR方法均具有良好的特异性和较高的灵敏度,能快速鉴别BTV-29,为BTV-29的致病性、诊断与流行病学研究提供了技术保障。
关键词： 蓝舌病病毒 BTV血清29型 血清型鉴定 qRT-PCR RT-PCR
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细粒棘球绦虫体外不同发育时期EgM9基因差异表达研究
《中国人兽共患病学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：目的 探究EgM9基因在细粒棘球绦虫体外不同发育时期的表达情况。方法 体外培养细粒棘球绦虫原头蚴（protoscoleces, PSCs）向成虫方向发育；收集不同发育时期的虫体，通过H＆E染色进行虫体形态学观察；运用荧光定量PCR方法，以β-Actin作为内参基因，使用2-ΔΔCt法计算虫体不同发育时期EgM9基因的表达情况，用SPSS 17.0软件进行单因素方差分析。结果 最终成功建立了细粒棘球绦虫原头蚴向成虫方向发育的体外培养模型，培养虫体至50 d;体外培养的虫体在第50 d时可产生3个节片；体外培养第50 d的虫体EgM9基因的表达量最高，与其他时期虫体表达量差异有统计学意义（F=11.32,P＜0.05）。结论 EgM9基因是细粒棘球绦虫成虫阶段高表达的基因，可能与虫体性器官发育有关。
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牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗双重实时荧光定量PCR方法的建立
《中国人兽共患病学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：目的 建立一种区分牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗株与布鲁氏菌野毒感染株的双重荧光定量PCR方法.方法 分别以布鲁氏菌4型分泌系统中VirB8基因、VirB12基因序列设计2对引物及探针,优化实时荧光PCR反应体系及条件.以牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗株、牛种布鲁氏菌A19疫苗株、羊种布鲁氏菌M5疫苗株以及猪种布鲁氏菌S2疫苗株、大肠杆菌、沙门氏菌基因组DNA进行Realtime-PCR扩增,评价该方法特异性.分别构建布鲁氏菌VirB12基因和VirB8基因片段阳性质粒,10倍系列稀释后进行Realtime-PCR扩增,测定该方法的敏感性.结果 本方法具有良好的特异性,牛种布鲁氏菌A19疫苗株、羊种布鲁氏菌M5疫苗株以及猪种布鲁氏菌S2疫苗株基因组DNA同时出现VirB8基因与VirB12基因阳性扩增,牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗株仅出现VirB8基因阳性扩增,大肠杆菌、沙门氏菌均未扩增出 目的条带,对VirB8基因及VirB12基因片段阳性质粒的检测限分别为约102copies/μL和103 copies/μL.该方法仅用于鉴别区分牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗株与布鲁氏菌野毒株.结论 本研究建立的布鲁氏菌双重Realtime-PCR方法,具有良好的特异性和敏感性,为今后鉴别牛种布鲁氏菌A19-△VirB12分子标记疫苗免疫牛与 自然感染牛提供技术支撑.
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绵羊FGF10基因克隆、序列分析及其在毛囊发育中的表达分析
《中国畜牧兽医 》 2021 北大核心
摘要：本试验旨在获得中国美利奴羊成纤维细胞生长因子10（fibroblast growth factor 10,FGF10）基因的编码区（CDS）全长序列并进行生物信息学分析,随后对FGF10基因在中国美利奴羊毛囊发育过程中的表达特征进行分析,明确其在中国美利奴羊毛囊发育过程中的表达模式,为进一步研究FGF10 mRNA表达水平与中国美利奴羊毛囊生长发育的表达调控机制奠定理论基础。采用PCR扩增获得中国美利奴羊FGF10基因CDS,并克隆到zero PCR@TM-Blunt进行测序验证;利用实时荧光定量PCR技术检测FGF10在中国美利奴羊毛囊发育过程中的表达差异。结果表明,绵羊FGF10基因CDS长度为696 bp（序列上传GenBank,获得登录号:MT872422）,编码231个氨基酸,与牛和山羊的氨基酸序列同源性达100%,存在1个信号肽和1个跨膜结构域,其为分泌通路信号蛋白;实时荧光定量PCR分析表明,FGF10基因在中国美利奴羊毛囊发育过程中均表达,在毛囊发育第85天表达最高,显著高于其他毛囊发育时期（P<0.05）。本研究获得中国美利奴羊FGF10基因完整的编码区序列和毛囊发育过程中的表达特征,生物信息学分析发现,FGF10基因编码区序列具有物种间的保守性,同时FGF10在绵羊毛囊不同发育阶段的皮肤组织中表达,由此表明,FGF10基因可能在绵羊毛囊的生长发育过程中发挥重要的生物学作用。
关键词： 中国美利奴羊 FGF10基因 克隆 实时荧光定量PCR 毛囊
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新疆某地区犬流感病毒血清学及病原学调查
《塔里木大学学报 》 2021
摘要：为了解新疆某地区流浪犬和宠物犬群体中犬流感现状,应用ELISA方法和RT-PCR方法,分别对2019年1月至9月期间收集的流浪犬和宠物犬共计250份血清样本和179份鼻拭子样本进行血清学和病原学检测。检测结果显示:血清学检测流浪犬和宠物犬流感抗体阳性率分别是58%（58/100）和5.33%（8/150）;病原学检测流浪犬和宠物犬流感病毒抗原阳性率分别是4%（4/100）和1.27%（1/79）,RT-PCR产物测序序列经BLASTn比对与犬流感H3N2亚型同源性最高。血清学结果显示调查地区一定比例的流浪犬和宠物犬曾感染犬流感;病原学结果显示调查地区流行H3N2亚型犬流感。犬流感病毒血清学及病原学调查可为公共卫生安全评估提供参考。
关键词： 犬流感病毒 血清学 病原学 ELISA RT-PCR
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细粒棘球绦虫TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用
《中国人兽共患病学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：目的为建立高效、特异的细粒棘球绦虫（Echinococcus granulosus,Eg）检测方法。方法本研究设计了一组基于Eg线粒体基因的特异性引物和TaqMan探针,通过反应体系及条件的优化,建立了Eg荧光定量PCR检测方法。结果该方法线性关系好,灵敏度高,在109～102拷贝/μL相关系数达0.998,灵敏度达102拷贝/L;在特异性试验中,与其他病原虫株无交叉反应,特异性较好;重复性试验变异系数均低于3%。应用该方法对50份临床样品进行检测,发现6份为Eg感染阳性。结论由此可见,建立的荧光定量PCR方法可快速、灵敏、特异地检测细粒棘球绦虫,具有一定的实际应用价值。
关键词： 细粒棘球绦虫 TaqMan探针 实时荧光定量PCR
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多房棘球绦虫TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用
《中国兽医学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：为建立高效、特异的多房棘球绦虫（Echinococcus multilocularis,E.m）检测方法,本研究设计了1组基于E.m线粒体NADH脱氢酶亚基3（NADH3）基因的特异性引物和TaqMan探针,通过对反应体系及条件进行优化,建立了E.m荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法线性关系好,灵敏度高,在109～101 拷贝/μL相关系数达0.998,灵敏度达10拷贝/μL;在特异性试验中,与其他病原虫株无交叉反应,特异性较好;重复性试验（组间和组内）的变异系数均小于3%。应用建立的方法对采集的50份临床样品进行检测,发现9份为E.m感染阳性。由此可见,建立的荧光定量PCR方法可用于泡型包虫病（alveolar echinococcosis, AE）的快速检测、定量分析及流行病学调查。
关键词： 多房棘球绦虫 TaqMan探针 实时荧光定量PCR
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伯氏疏螺旋体TaqMan-MGB探针荧光定量PCR方法的建立及对新疆地区蜱的检测
《中国动物检疫 》 2019
摘要：为建立一种TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR方法,来快速、特异地检测伯氏疏螺旋体,根据GenBank发表的伯氏疏螺旋体16SrRNA序列,应用分子生物学软件进行比对,选取保守序列设计特异性引物及TaqMan-MGB探针,并优化荧光定量PCR反应体系及条件,分别对大肠杆菌、沙门氏菌及钩端螺旋体进行扩增;构建伯氏疏螺旋体标准株16SrRNA基因片段阳性质粒,10倍系列稀释后进行real-time PCR扩增,测定该方法的敏感性.结果可见:仅伯氏疏螺旋体出现阳性扩增,而大肠杆菌、沙门氏菌及钩端螺旋体扩增均为阴性;该方法对阳性质粒的检测限约为100 copies/μL.应用该方法对新疆地区的100份蜱DNA样本进行检测,发现7份为伯氏疏螺旋体阳性.结果表明,本研究建立的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR方法具有较高的特异性及良好的敏感性,为今后伯氏疏螺旋体的快速诊断及流行病学调查提供了技术支撑.
关键词： 伯氏疏螺旋体 TaqMan-MGB探针 荧光定量PCR 蜱 检测 新疆
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