科研产出
羊种布鲁氏菌Rev.1疫苗株VirB12基因缺失株的构建及鉴定
《中国预防兽医学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：为获得毒力较弱且能够区分疫苗免疫与自然感染的羊种布鲁氏菌候选疫苗株,本研究构建羊种布鲁氏菌Rev.1疫苗株VirB12基因缺失突变株。分别扩增Rev.1疫苗株VirB12基因上下游同源臂序列以及卡那霉素抗性基因,采用融合PCR方法将3个基因片段连接构建突变盒,连接至pMD19-T载体,电转化入布鲁氏菌Rev.1感受态细胞筛选阳性克隆,获得Rev.1-ΔVirB12突变株。Rev.1-ΔVirB12连续传代15代未发生回复突变。羊种布鲁氏菌疫苗株Rev.1-ΔVirB12的构建为羊种布鲁氏菌疫苗研制奠定了基础。
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去势对西门塔尔牛牛肉品质的影响
《草业科学 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：为分析去势对17~21月龄西门塔尔牛牛肉品质的影响,本研究选取50头健康的、16月龄的西门塔尔公牛,进行药物驱虫后,依据体重进行配对试验设计,设置去势组和未去势组,每组25头,同一阶段饲喂相同饲粮,试验期150d。结果表明,与未去势组相比,去势极显著提高了牛肉的肌红蛋白含量(P<0.01),极显著降低了背最长肌的pH(P<0.01),显著提高了牛肉的大理石花纹、脂肪、干物质、油酸和单不饱和脂肪酸含量和MUFA/SFA、MUFA/PUFA比值(P≤0.05);去势具有降低牛肉硬脂酸含量的趋势(0.05 关键词：
去势
西门塔尔牛
肉品质
产肉性能
大理石花纹
脂肪酸
胆固醇
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刈割期和添加剂对苜蓿青贮发酵品质和 CNCPS蛋白组分的影响
《草业科学 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：为研究刈割时期及添加剂对苜蓿(Medicago sativa)青贮品质的影响,本试验选择2个茬次,现蕾、初花、盛花3个时期刈割,并以无添加(CK)、丙酸钠(SP,0.5%)、乳酸菌(LD,106 cfu·g~(-1))3种处理进行苜蓿青贮制作,在贮存45d后取样,分析其发酵品质及营养价值。结果发现,随着收获时期的延迟,青贮苜蓿pH值呈下降的趋势;丙酸钠及乳酸菌添加剂的添加对苜蓿青贮饲料的发酵品质有显著的改善作用;随着同一茬次生育期的延长,青贮苜蓿中的粗蛋白(CP)含量显著降低(P<0.05);刈割时期可显著降低苜蓿青贮饲料的pH值并明显提高乳酸含量(P<0.05),对乙酸及丙酸含量影响不显著(P>0.05)。而添加剂可显著增加乙酸含量(P<0.05),两者存在显著互作效应(P<0.05)。添加乳酸菌的现蕾期苜蓿青贮品质最佳。应用康奈尔净碳水化合物-蛋白质体系(CNCPS)提出的方法测定表明,第1茬盛花期的苜蓿青贮饲料的非蛋白氮(PA)含量较高,苜蓿青贮饲料各处理中的中速降解蛋白质(PB2)含量均是占可降解蛋白质(PB)含量的最大比例。
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去势对17～21月龄西门塔尔牛激素分泌的影响
《西北农业学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：旨在研究去势对17~21月龄西门塔尔牛血清激素及月增量的影响。选取50头健康、16月龄的西门塔尔公牛,依据体质量进行配对试验,分为去势组和未去势组,每组25头,同一阶段饲喂相同饲粮,试验期150d。结果表明,全期平均月增量去势组比未去势组低6.14%,差异不显著;血清睾酮去势组显著低于未去势组;去势组雌二醇质量浓度有高于未去势组的趋势;去势组的生长激素质量浓度极显著低于未去势组;生长抑素质量浓度去势组显著高于未去势组;去势组的皮质醇质量浓度有低于未去势组的趋势。血液中促肾上腺皮质激素、胰高血糖素、胰岛素、前列腺素E2、甲状腺素和三碘甲腺原氨酸的质量浓度在去势组与未去势组间差异均不显著。表明去势致使17~21月龄西门塔尔牛血液中生长激素质量浓度降低,生长抑素质量浓度增加,但对月增量无显著影响。
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羊口蹄疫灭活疫苗分别与小反刍兽疫活疫苗及布氏菌活疫苗联合使用的免疫效果分析
《中国生物制品学杂志 》 2017 CSCD
摘要：目的分析羊口蹄疫灭活疫苗(inactivated food and mouth disease vaccine,IFMDV)分别与小反刍兽疫活疫苗(live attenuated peste des petits ruminants vaccine,LPPRV)及布氏菌活疫苗(live Brucella vaccine,LBV)联合使用的免疫效果。方法应用口蹄疫O型、亚洲1型二价灭活疫苗与LPPRV联合免疫山羊,观察山羊不良反应,采用病毒中和试验法和液相阻断ELISA法分别测定山羊血清中小反刍兽疫抗体及口蹄疫抗体水平。应用口蹄疫O型、A型、亚洲1型三价灭活疫苗与LBV(M5株)联合免疫绵羊,观察绵羊的不良反应,采用试管凝集试验及液相阻断ELISA法检测绵羊血清中布氏菌抗体及口蹄疫抗体水平。结果 IFMDV分别与LPPRV及LBV联合免疫山羊及绵羊,均未见明显的不良反应,仅出现一过性体温升高现象;IFMDV(肌肉)和LPPRV(皮下)同时联合免疫,山羊血清中小反刍兽疫抗体水平明显高于单独免疫LPPRV组(P<0.05);IFMDV与LBV联合免疫,绵羊血清中布氏菌抗体水平高于单独免疫LBV组(P<0.05),且联合免疫组抗体阳性率达100%,比单独免疫LBV组提高了13%。结论 IFMDV分别与LPPRV、LBV联合使用具有良好的安全性,且可提高LPPRV及LBV的免疫效果。
关键词： 羊 口蹄疫灭活疫苗 小反刍兽疫活疫苗 布氏菌活疫苗 联合免疫
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犬粪便中细粒棘球绦虫抗原双抗体夹心ELISA检测方法的建立及应用
《中国生物制品学杂志 》 2017 CSCD
摘要：目的建立简便、特异的检测犬粪便中细粒棘球绦虫抗原的双抗体夹心ELISA方法,并进行验证及初步应用。方法以细粒棘球绦虫EdiagA864蛋白为抗原,免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体;利用HRP标记兔抗细粒棘球绦虫EdiagA864多克隆抗体,通过溶解、超声方法处理犬粪便样品;以抗细粒棘球绦虫单克隆抗体2D12作为捕获抗体,HRP标记的兔抗细粒棘球绦虫EdiagA864多克隆抗体为检测抗体,通过棋盘法确定抗体最佳包被浓度、最佳封闭剂、待检粪样最佳稀释比例及酶标抗体最佳浓度。应用建立的双抗体夹心ELISA法对来自长春地区的64份犬粪便样品及来自新疆的8份犬粪便阳性样品进行检测。结果兔抗EdiagA864多克隆抗体的效价为105。建立的双抗体夹心ELISA法的最佳检测条件为:抗体包被浓度为1∶50,封闭剂为1%BSA,粪液稀释度为1∶5,酶标二抗稀释度为1∶800。建立的双抗体夹心ELISA法与犬贾第虫和犬蛔虫阳性样品均无交叉反应;检测不同稀释度的粪便液,当稀释至1∶20时,P/N仍大于2;检测6份阳性样品与4份阴性样品的批间和批内变异系数均小于8。用建立的方法检测8份阳性样品的结果均为阳性,64份待检样品的结果均为阴性。结论建立的双抗夹心ELISA方法特异性较强,敏感性较高,重复性较好,为细粒棘球绦虫流行病学调查及诊断提供了一种更简便、快速、特异的免疫学检测方法。
关键词： 细粒棘球绦虫 双抗体夹心ELISA EdiagA864 多克隆抗体
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苏博美利奴羊胎儿皮肤毛囊结构及形态发育
《中国农业科学 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：【目的】研究苏博美利奴羊毛囊的组织结构与形态发育过程,为解析细毛羊毛囊发育的分子调控机制奠定组织学基础。【方法】采用石蜡切片技术分析胎龄为第65、85、105和135天的苏博美利奴羊胎儿头部、颈侧、颈上缘、鬐甲、背部、体侧、肩甲、腹部、荐部及股部等10个不同部位皮肤的组织学特性。【结果】苏博美利奴羊毛囊结构同其它动物一样,由毛球、连接组织鞘、外根鞘、内根鞘和毛干等几部分组成。在胎龄65d时初级毛囊(primary follicles,PF)已经发生形成毛芽,毛芽延长,继续向真皮层深入,形成柱状结构,通过由大量真皮细胞在末端聚集,形成帽子结构,各部位表皮均形成完整的结构。胎龄85d时毛囊上部形成一个膨大部,在毛乳头上方形成锥形结构,毛球基本形成,毛乳头长度明显大于宽度;在初级毛囊基底部可见次级毛囊(secondary follicles,SF)的囊泡结构,并形成皮脂腺原始细胞。在胎龄105d时次级毛囊大量形成,伴随着初级毛囊毛芽伸长,次级毛囊毛芽向真皮层深入,毛乳头直径逐渐增大,皮脂腺开始形成;原始次级毛囊颈部隆突部开始再分化出再分化次级毛囊(secondary-derived follicles,SD),并可见汗腺,毛管发育完整;已形成完整的毛囊群结构,主要为三元毛囊群,每个毛囊群由1—3个初级毛囊和围绕其周围的几个次级毛囊组成。胎龄135d时大量形成再分化次级毛囊,形成成熟的汗腺,大部分初级毛囊和部分次级毛囊发育成熟,毛囊形成角质化毛干并穿出体表。【结论】苏博美利奴羊胚胎皮肤初级毛囊约50—55d开始形成;胎龄65—75d是初级毛囊形成的重要时期;胎龄80—85d是次级毛囊形成期,此时期,初级毛囊大量形成;胎龄105—135d是次级毛囊大量再分化,再分化次级毛囊形成及发育的关键时期。
关键词： 苏博美利奴羊 毛囊结构 形态变化 初级毛囊 次级毛囊 再分化次级毛囊
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绵羊FSHR基因可变剪接体的克隆、鉴定及表达分析
《江苏农业学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：根据Gen Bank中绵羊促卵泡激素受体基因(FSHR)的mRNA序列(登录号:NM_001009289.1)设计引物,反转录PCR(RT-PCR)扩增蛋白编码区(CDs)区,以获取绵羊FSHR基因可变剪接体,并通过Western blot验证其在组织中的表达,通过免疫组织化学方法检测其在卵泡中的表达位置。结果表明,在绵羊卵巢中除了全长的、编码695个氨基酸的FSHR表达产物外,还鉴定到分别编码694个、633个、595个、582个和533个氨基酸的FSHR可变剪接形式的转录产物。在卵泡中主要以695(694)、633和595 3种转录本形式存在。但在颗粒细胞中绵羊促卵泡激素受体主要以经典分子即695个氨基酸的形式存在。在卵泡发育过程中,FSHR蛋白质含量发生变化:在初级卵泡中,FSHR主要在卵母细胞中表达,而不是在单层的颗粒细胞中表达,在次级卵泡中,FSHR在颗粒细胞和卵母细胞中均不表达,到三级卵泡(有腔卵泡)时,FSHR蛋白质在颗粒细胞中表达丰富。可见,绵羊FSHR基因虽然存在可变剪接体的结构,但其功能主要取决于经典型的695个氨基酸蛋白质分子,并且对初级卵泡的发育具有一定的作用。
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小反刍兽疫病毒N蛋白的原核表达及其生物信息学分析
《中国生物制品学杂志 》 2017 CSCD
摘要：目的原核表达小反刍兽疫病毒(peste-des-petits ruminants virus,PPRV)N基因,评价其抗原性,并进行生物信息学分析。方法参照GenBank中登录的PPRV(Nigeria/75/1)N基因序列,人工合成该基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),IPTG诱导N基因原核表达,表达产物进行SDS-PAGE及Western blot分析。运用Expasy Protparam和SOPMA软件对PPRV N基因编码的氨基酸序列进行生物信息学分析。结果成功表达了PPRV N基因,其融合蛋白相对分子质量约64 400,主要以包涵体形式存在,并可被PPRV羊免疫血清特异性识别。PPRV N蛋白含524个氨基酸,相对分子质量约57 900,亲水性氨基酸占57.63%,疏水性氨基酸占42.17%,碱性氨基酸占12.21%,酸性氨基酸占14.12%,等电点理论值为5.11;亲水性平均系数为-0.296,不稳定系数为48.20;二级结构存在242个α螺旋(占46.18%),42个β转角(占8.02%),164个无规则卷曲(占31.3%),76个延伸链(占14.50%)。结论原核表达的PPRV N蛋白具有良好的特异性和抗原性,为单克隆抗体的制备及快速诊断方法的建立提供了参考。
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O型口蹄疫病毒不同宿主适应毒株P1和3A基因的差异分析
《畜牧兽医学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：为了明确O型口蹄疫病毒不同宿主适应毒株P1和3A基因位点的差异性,研究其遗传变异趋势,找出不同宿主适应毒株在P1和3A基因水平上位点的变异情况,将O型口蹄疫病毒O/XJ/10-11株分别接种于牛、乳鼠、猪及BHK-21细胞,获得相应的宿主适应毒株,提取RNA,反转录并扩增P1和3A基因,目的片段产物经琼脂糖凝胶电泳回收,并将其克隆到pMD19-T载体上,筛选阳性菌落,测序并分析其基因序列。结果表明:牛、乳鼠、猪、BHK-21细胞四种宿主适应毒株,核苷酸和氨基酸序列均未发生缺失,主要抗原位点稳定;P1基因发生了部分变异,变异程度依次为VP1、VP2>VP3>VP4,VP4基因最为保守;3A基因较稳定,变异较少;不同宿主适应毒株的变异程度依次如下:猪适应毒株>BHK-21细胞适应毒株>牛适应毒株>鼠适应毒株。O型口蹄疫病毒在不同宿主传代过程中造成VP1基因的变异,但主要抗原位点稳定;VP2基因的变异均位于抗原表位上;鼠适应毒株作为口蹄疫原始毒种的保存更为有利。
关键词： O型口蹄疫病毒 不同宿主适应毒株 基因位点 差异性
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