科研产出
细粒棘球绦虫Hsp70基因的克隆、表达及抗体制备
《中国农业科学 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：【目的】克隆细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,E.g)热休克蛋白家族基因Hsp70,在原核细胞中表达、纯化Hsp70蛋白并制备其特异性抗体。【方法】从包囊中分离原头蚴,提取RNA,RT-PCR扩增EgHsp70基因的cDNA,将其构建至原核表达载体pMAL-p2x,转化大肠杆菌BL-21菌株。通过改变诱导温度、IPTG浓度和诱导时间筛选出EgHsp70融合蛋白可溶性表达的最佳条件。并用麦芽糖亲和层析法纯化该蛋白。纯化蛋白经皮下多点注射免疫新西兰白兔制备抗血清,ELISA和Western blotting检测血清效价和特异性。【结果】RT-PCR扩增获得EgHsp70基因的cDNA,酶切和测序结果表明EgHsp70基因已克隆入pMAL-p2x。表达条件优化实验结果筛选出Hsp70融合蛋白可溶性表达的最佳条件为:当A600为0.6时,以0.3 mmol.L-1 IPTG于30℃条件下诱导表达4 h。SDS-PAGE显示Hsp70融合蛋白相对分子质量约为68.6kD,经麦芽糖亲和层析法纯化获得了Hsp70融合蛋白,其表达量为2.5 mg.L-1。Western blotting检测证明制备的抗血清与EgHsp70融合蛋白、原头蚴粗提抗原、E.granulosis虫体蛋白和E.granulosis虫体表面蛋白均能特异性结合,ELISA检测表明获得的抗血清效价达到1﹕256 000。【结论】在大肠杆菌中表达并纯化获得了EgHsp70融合蛋白,并制备了高效价的兔抗EgHsp70蛋白抗血清,为研制包虫病疫苗及相关诊断试剂奠定了基础。
关键词： 细粒棘球绦虫 热休克蛋白家族基因Hsp70 抗血清
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细粒棘球绦虫成虫表膜糖抗原的免疫性分析
《中国农业科学 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：【目的】探索细粒棘球绦虫成虫表膜糖抗原的免疫性。【方法】细粒棘球绦虫成虫虫体冻融产物,经蛋白酶K消化,离心上清作为粗提表膜糖抗原,SDS-PAGE鉴定糖抗原成分,硫酸-蒽酮法测定多糖浓度,ELISA、Western-blot和IFA法分别检测免疫小鼠抗血清抗体效价和特异性以及确定抗原在虫体组织中的位置。【结果】SDS-PAGE图谱显示无蛋白条带出现,表明成虫膜蛋白被蛋白酶K完全降解;制备的糖抗原浓度为2.54mg.mL-1,初步确定为糖抗原。ELISA结果显示,随着免疫次数增加,抗血清中特异性抗体(IgG、IgM和IgA)效价也随之升高。与阴性血清相比,IgG、IgM和IgA的P/N值分别为4.9、3.2和6.4。未检测到特异性IgE。Wenstern-blot检测结果显示,抗血清与原头蚴粗提虫体蛋白、细粒棘球绦虫成虫表膜蛋白、表膜糖抗原有效识别。IFA显色结果显示糖抗原在细粒棘球绦虫虫体表膜中有表达。【结论】经蛋白酶K消化后提取的细粒棘球绦虫表膜糖抗原具有良好的的免疫原性和免疫反应性,有望用于包虫病的诊断和免疫。
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基于“风险邻近”的全球尺度非洲猪瘟发生状况及其输入风险模型构建
《畜牧兽医学报 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：作者旨在探寻全球尺度上非洲猪瘟的发生状况,并构建其输入的风险模型。在数据挖掘和概率风险评估理论基础上,应用地理学第一定律、风险邻近和地理风险分析的方法开展研究。结果显示:①全球猪的养殖主要分布在中国、美国、巴西、加拿大及欧洲的德国、西班牙、法国等国家,养殖数量占全球猪存栏的76.67%左右。养殖较为密集的国家和地区主要为西班牙、德国、荷兰、比利时及中国、越南等。②基于地理学第一定律,在疫病风险管理和控制中我们提出"风险邻近"的概念,即在空间和时间上邻近的事件对与其相邻的空间单元和时间单元的风险影响要远大于较远的空间和时间单元的影响权重。③几内亚比绍、纳米比亚、俄罗斯、塞内加尔、贝宁、布基纳法索、佛得角、加纳、意大利、马达加斯加、莫桑比克、多哥等国家和地区在近年度报道发生多频次的非洲猪瘟疫情。基于"风险邻近",这些国家被认为是目前全球非洲猪瘟疫情风险最高的地区和国家,从该群体的国家进口和输入猪及其产品会带来较大输入风险。④从具有非洲猪瘟疫情发生风险的区域输入猪及其产品会给输入区域带来输入风险,其输入一批次产品的风险大小可以用模型表达为:PInport=f1.(1-Se)+(1-f1).f2.(1-Se)+(1-f1).(1-f2).f3.(1-Se)+(1-f1).(1-f2).(1-f3).f4.(1-Se)+(1-f1).(1-f2).(1-f3).(1-f4).f5.(1-Se),其中出口国和出口地区的产地检疫所能感知和发现的风险大小———f1是整个输入风险中权重最大的。这提示在动物及其产品移动和贸易中,有效的产地检疫有着极端重要性。目前全球范围内,非洲猪瘟的主要风险来自于几内亚比绍、纳米比亚、俄罗斯、塞内加尔、贝宁、布基纳法索、佛得角、加纳、意大利、马达加斯加、莫桑比克、多哥等国家,其次为喀麦隆、刚果、马拉维、卢旺达、乌干达、安哥拉、肯尼亚、尼日利亚、南非、坦桑尼亚、赞比亚等国家。从非洲猪瘟风险国家输入猪及其产品会带来一定的输入风险。有效强化产地检疫,开展风险区划,对非洲猪瘟等疫病的风险管理具有重要的意义。
关键词： 非洲猪瘟 风险评估 风险模型 地理学第一定律 地理风险分析 风险邻近 产地检疫 风险区划 风险管理
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新疆荷斯坦牛β防御素5基因的克隆、表达及表达产物的抑茵活性
《西北农林科技大学学报(自然科学版) 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：[目的]克隆和表达新疆荷斯坦牛中性粒细胞防御素5(BNBD5)基因,对BNBD5蛋白进行纯化并分析其抗菌活性.[方法]利用RT-PCR方法扩增新疆荷斯坦奶牛BNBD5的cDNA序列,将BNBD5 cDNA克隆到原核表达载体pGEX-4T-2,测序分析后转化大肠埃希菌BL21(DE3).经IPTG诱导后,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting分析;利用GST亲和柱纯化BNBD5蛋白,并进行体外抑菌试验.[结果]通过PCR扩增获得了218bp的牛BNBD5全长cDNA序列,经IPTG诱导,获得了约33 ku的牛BNBD5蛋白.牛BNBD5蛋白在1525℃培养时的可溶性较37℃时多,且大多以包涵体形式存在,经纯化后最终获得了少量的目的蛋白.纯化的BNBD5蛋白对标准金黄色葡萄球菌和标准大肠埃希菌均具有明显的抑菌活性.[结论]克隆、表达了牛BNBD5基因,表达的BNBD5蛋白对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌都有抑菌活性.
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哈萨克马的DRA与DQA基因的SSCP检测及序列分析
《新疆农业科学 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：【目的】了解哈萨克马ELA-DRA*exon2、ELA-DQA*exon2的等位基因分布及其特性,为马的抗病育种提供理论基础。【方法】采用聚合酶链式反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)方法检测哈萨克马ELA-DRA*exon2、ELA-DQA*exon2的等位基因分布,并对不同等位基因的核苷酸与氨基酸序列进行分析。【结果】在47匹哈萨克马中,ELA-DRA* exon2有3个等位基因,其中两种等位基因在纯合子中被检出,另外一种等位基因在杂合子中被检出;ELA-DQA* exon2有7个等位基因,且都以纯合子被检出,通过核苷酸序列比对发现其中5个为新等位基因。【结论】ELA-DRA*exon2、ELA-DQA*exon2的各每位基因序列分析结果表明,发生非同义替换的多态位点均主要分布在抗原结合位点对应的编码序列中。
关键词： 哈萨克马 PCR-SSCP ELA-DRA*exon2 ELA-DQA*exon2 等位基因
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TLR2基因多态性与奶牛体细胞评分的相关性研究
《畜牧兽医学报 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：旨在分析Toll-样受体2在奶牛隐性乳房炎中的作用。本研究以同一牛场内的中国荷斯坦奶牛和新疆褐牛为研究对象,选取奶牛体细胞数小于20万和大于100万的个体各15头,对TLR2基因进行测序,然后对发现的多态位点进行PCR-RFLP检测,分析这些位点与体细胞评分(SCS)的相关性。结果发现了TLR2基因E+189、E+631和E+2260 3个SNP位点,其中E+631和E+2260位点为本试验首次发现。E+189、E+631和E+2260 3个SNP位点在2个品种内均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05);3个位点在2个品种间的基因型分布差异都极显著(P<0.01)。分析每个SNP位点与SCS的相关性,显示TLR2E+189位点AA比BB和AB基因型个体的SCS高(P<0.05),AB与BB基因型个体的SCS差异不显著(P>0.05);说明BB基因型个体的乳房炎发病率低。而TLR2E+631的SCS和TLR2E+189位点表现相似,但各个基因型个体间的SCS差异不显著(P>0.05)。E+2260位点AA基因型个体比AB的SCS低(P>0.05)。新疆褐牛的SCS低于荷斯坦牛(P<0.01),说明新疆褐牛乳房炎发病率比荷斯坦牛低。在发现的3个SNP位点中,E+189位点对奶牛的SCS有显著影响(P<0.05),TLR2基因SNP位点在2个品种内的分布差异可能是新疆褐牛比荷斯坦牛乳房炎发病率低的原因之一。
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新疆褐牛POU1F1基因多态性分析及早期生长曲线比较
《西北农业学报 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：垂体特异性转录因子1((Pituitary Specific Transcription Factor 1,POU1F1)基因是POU基因家族的成员之一,对哺乳动物生长发育、新陈代谢起主要的调控作用。采集116份新疆褐牛血样,利用PCR-RFLP技术检测POU1F1基因第6外显子的多态性,分析不同基因型与生长性状的相关性。结果表明,新疆褐牛的POUIFI基因第6外显子HinfI位点有多态性,新疆褐牛群体在该位点上处于Hardy-Weinberg平衡状态,等位基因A/B的频率分别为0.375/0.625。3种不同基因型间个体出生体质量及1~5月龄体质量的差异不显著(P>0.05),而BB基因型6月龄体质量与AA基因型差异显著(P<0.05)。应用Logistic、Gompertz和Von Bertalanffy 3种非线性生长模型对新疆褐牛POU1F1基因3种基因型个体进行生长曲线拟合,所选生长曲线模型均可以较好地预测机体的生长发育情况,拟合优度(R2)均大于0.995。AA、AB、BB基因型3种生长曲线比较,BB基因型具有极限体质量大,生长速率快,拐点体质量及生长拐点月龄大等特点。
关键词： 新疆褐牛 POU1F1基因 PCR-RFLP 生长曲线
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伊犁绢蒿根系贮存性营养物质和渗透调节物质季节变化及对刈割强度的响应
《新疆农业科学 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：【目的】通过小区控制刈割试验,研究及了解不同刈割强度对伊犁绢蒿根系贮存性营养物质及渗透调节物质的影响。【方法】分别用蒽酮比色法、茚三酮比色法、考马斯亮蓝法测定伊犁绢蒿根系可溶性糖、淀粉、脯氨酸、可溶性蛋白含量。【结果】(1)伊犁绢蒿根系随季节变化,可溶性糖呈"双峰曲线"变化,淀粉呈倒"S"变化,游离脯氨酸呈不规则"单峰曲线"变化,可溶性蛋白呈"微波浪曲线"变化,且各种处理出现的峰值时间相同;(2)伊犁绢蒿根系可溶性糖和淀粉变化趋势相反,在营养物质积累前(9月15日以前)呈互补状态,但淀粉含量比可溶性糖含量高;(3)伊犁绢蒿根系对贮存营养物质和渗透调节物质的响应均存在滞后性,相比而言,可溶性蛋白的滞后时间最短;(4)刈割强度在各处理间均有显著性影响(P<0.05),有些差异达极显著(P<0.01)。【结论】刈割强度对伊犁绢蒿根系的生理抗性有很大影响。
关键词： 根系 刈割强度 季节变化 响应 伊犁绢蒿 贮存性营养物质 渗透调节物质
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影响荷斯坦奶牛难产度的因素分析
《新疆农业科学 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：【目的】从繁殖和生产性能上探讨各因素对新疆地区荷斯坦奶牛难产度的影响。【方法】采用SAS8.1软件对影响难产度的因素进行最小二乘方差分析。【结果】:不同胎次对难产度有显著的影响(P<0.05);不同产犊季节对难产度有显著的影响(P<0.05);怀孕天数对难产度的影响不显著(P>0.05);产犊间隔对难产度有极显著的影响(P<0.01);犊牛的性别对难产度有显著的影响(P<0.05);犊牛的初生重对难产度有极显著的影响(P<0.01);产犊类型对难产度有极显著的影响(P<0.01);305 d产奶量对难产度影响不显著(P>0.05)。【结论】通过大量的记录资料对荷斯坦奶牛难产度因素进行分析,这将有利于牛场有效地预防难产,降低难产的发生率。
关键词： 荷斯坦奶牛 难产度 胎次 产犊季节 产犊间隔 305d产奶量
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基因表达差异对牛胚胎发育潜能的影响
《动物医学进展 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：随着牛胚胎体外生产(IVP)技术的不断成熟,体外胚胎生产在一些国家已进入商业化运营阶段。但与体内胚胎相比其移植受体妊娠率、产犊率及胎儿的后天发育能力均较差。因此,开发一种既可靠又实用的检测胚胎发育潜能的技术显得尤为重要。应用实时荧光定量PCR技术检测早期胚胎基因表达,通过分析mRNA的表达丰度来评价卵母细胞成熟情况和胚胎质量是一种可行的方法。论文综述了国内外有关牛卵母细胞成熟和早期胚胎发育过程中部分基因mRNA表达状况,分析了基因表达与胚胎潜能的关系。
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