科研产出
布鲁氏菌PCR鉴定方法的研究与应用
《中国人兽共患病学报 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：目的采用PCR、PCR-SSCP方法对布鲁氏菌进行快速鉴定,并对其种、型鉴别。方法分析已发表布鲁氏菌属、种、型基因序列,寻找出不同布鲁氏菌的种、型特异性碱基分布规律,设计特异性引物,用于布鲁氏菌属、种、型的鉴定;根据聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析原理,建立PCR-SSCP方法,用于区分牛种A19疫苗株与其他型布鲁氏菌。结果所建立的PCR方法能高效、准确鉴定出布鲁氏菌,并能对其种、型进行区分;PCR-SSCP方法可将A19疫苗株从其他型布鲁氏菌中区分出来。结论利用PCR、PCR-SSCP方法能快速、准确地进行布鲁氏菌属、种、型以及疫苗株A19的鉴别,且简便、可靠,便于临床应用。
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玻璃化冷冻对绵羊卵母细胞中母源基因mRNA表达量的影响
《畜牧兽医学报 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：为详细了解玻璃化冷冻对绵羊卵母细胞中母源基因mRNA表达量的影响,分别玻璃化冷冻GV期和IVM期(18、24h)绵羊卵母细胞,解冻后进行体外培养。GV期和IVM期卵母细胞经过冷冻-解冻后,卵裂率(10.37%、23.17%、33.07%)均极显著低于对照组(82.96%,P<0.01),且冷冻-解冻后的GV期卵母细胞卵裂率极显著低于冷冻-解冻后的IVM期卵母细胞(P<0.01)。本试验利用荧光实时定量PCR技术检测4种母源基因:Gdf9(生长分化因子-9)、Zar1(合子阻泄因子)、Mater(胚胎必要的母体抗原)、Dnmt1(DNA甲基化转移酶1)在不同处理后的绵羊卵母细胞中的mRNA含量。结果表明,4个基因的mRNA在GV期的表达量均高于IVM期的卵母细胞(P<0.01);经玻璃化冷冻处理后,4个基因的mRNA表达量升高,其中GV期含量最高(P<0.01)。结果提示,绵羊GV或IVM期卵母细胞玻璃化冷冻导致母源基因mRNA表达量升高,可能会对胚胎发育产生负面影响。
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BCB筛选后的绵羊卵母细胞中母源基因mRNA表达量的差异性分析
《中国草食动物 》 2010
摘要：卵母细胞的胞质成熟对于受精后正常的胚胎发育是至关重要的,亮甲酚蓝染色液(BCB)能有效筛选出胞质成熟卵母细胞。为详细了解BCB筛选出的不同质量绵羊卵母细胞中母源基因mRNA的表达量的差异性,从而证明BCB对绵羊卵母细胞筛选的可行性和可靠性,判断4种母源基因与卵母细胞的胞质成熟是否有关,为哺乳动物卵母细胞成熟和早期胚胎发育分子机理的研究提供参考。本实验将卵母细胞置于BCB染色液中,细胞质着蓝色的为BCB+,没着蓝色的为BCB-;并利用荧光实时定量PCR技术检测4种母源基因Gdf9(生长分化因子-9)、Zar1(合子阻泄因子)、Mate(r胚胎必要的母体抗原)和Dnmt1(DNA甲基化转移酶1)在不同质量绵羊卵母细胞中的mRNA含量。结果表明:BCB染色筛选后,阴性卵母细胞4种基因的mRNA表达量比阳性高(P<0.01),这充分证明,BCB能有效筛选出胞质成熟度好的绵羊卵母细胞,这4种母源基因与卵母细胞的胞质成熟有关。
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猪弓形虫特异PCR诊断方法的建立
《新疆农业科学 》 2010 北大核心 CSCD
摘要：【目的】建立特异PCR方法诊断猪弓形虫病。【方法】以核糖体DNA第一内转录间隔区(ITS1)序列作为弓形虫种特异的遗传标记,优化PCR反应条件,对猪弓形虫分离株和临床病料进行检测。随机取阳性PCR扩增片段进行克隆,测序鉴定。【结果】在猪弓形虫分离株中PCR扩增出目的条带,且在肺门淋巴结和肠系膜淋巴结中扩增出特异性条带;PCR方法能检测到的最低DNA量为7.81 pg/μL;测序结果显示核苷酸序列与Genbank中已登录的猪弓形虫IST1基因序列相应部分序列完全相同。【结论】该PCR方法具有较高的敏感性和特异性,是诊断猪弓形虫病的一种快速检测方法。
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布鲁氏杆菌感染和免疫模型动物血清学与细菌学检测的比较研究
《草食家畜 》 2010
摘要：用布鲁氏杆菌强毒感染、弱毒疫苗免疫制备模型实验动物,采集不同时段各个试验组的血清、全血、脏器样品(心、肝、脾、肺、肾、睾丸或子宫、淋巴),进行虎红平板凝集试验、试管凝集试验、补体结合试验、细菌培养及PCR等检测。分析攻毒组和免疫组之间、免疫组之间的血清学与细菌学检测诊断的差异。结果表明:感染和免疫、免疫组相互间的不同血清学与细菌学检测均受到时段的限定。
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用半定量RT-PCR法检测BⅢB4基因在绵羊皮肤组织中的mRNA表达
《新疆农业科学 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：利用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,测定新吉细毛羊皮肤组织中BⅢB4基因mRNA表达水平,以18SrRNA为内标,分析相对表达量及其与羊毛细度的关系。通过探讨和优化PCR体系中退火温度、MgCl2浓度和循环次数等参数,建立了检测羊毛细度相关基因mRNA表达的半定量RT-PCR体系。用Independent Samples T Test分析BⅢB4 PCR产物与18SrRNA PCR产物电泳后的灰度比值,可知BⅢB4基因mRNA表达量对羊毛细度的影响。
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狂犬病病毒口服疫苗株SRV_9全长基因质粒的构建
《新疆农业科学 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：狂犬病病毒(Rabies Virus)是一种致死性的人畜共患病。为了深入研究狂犬病病毒的基因组特性及构建新型病毒载体,研究根据GenBank中已公布的狂犬病病毒口服疫苗株SRV9(登录号:AF499686)基因组序列设计数对引物,以SRV9病毒为材料,通过RT-PCR技术将总RNA中SRV9全长基因组11,928 bp分5段扩增,分别克隆到pMD18-T或pGEM-T载体测序鉴定。测序正确后,再克隆至pBluescript skⅡ(+)载体,利用扩增片段自身内切酶切位点顺次进行全长连接,获得含SRV9全长基因组的质粒pBLSRV9。通过基因组序列同源性比较分析,SRV9株具有稳定的遗传特性,为进一步探索狂犬病病毒的复制、感染、致病及免疫分子机制和研制新型狂犬病病毒疫苗奠定良好的基础。
关键词： 狂犬病病毒SRV9 RT-PCR 基因序列分析 全长基因质粒构建
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禽流感病毒新疆株A/Duck/XJ/4(H5N1)的PB1、PB2和PA基因测序及进化分析
《山东农业大学学报(自然科学版) 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：通过RT-PCR技术对禽流感病毒新疆株A/Duck/X J/4(H5N1)的PB1、PB2和PA基因分别进行了扩增及克隆,测序结果表明该毒株的PB2、PB1和PA基因全长核苷酸序列分别为2341 bp、2282 bp和2187 bp。同源性分析表明A/Duck/X J/4(H5N1)株与禽源、野生鸟类和猪源的禽流感毒株均有很高的同源性(86.3%~99.6%)。与人源毒株相比,PB2和PA与A/HK/156/97(H5N1)株的同源性较低(86.3%~88.7%);与A/V ietnam/CL01/2004(H5N1)株和A/hum an/Zhejiang/16/2006(H5N1)株的同源性较高(93.0%~98.8%);PB1与人源毒株A/HK/156/97(H5N1)、A/V ietnam/CL01/2004(H5N1)、A/hum an/Zhejiang/16/2006(H5N1)同源性为91.1%~93.2%。
关键词： 禽流感病毒 PB1、PB2和PA基因 RT-PCR 序列分析
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禽流感病毒新疆株A/Duck/XJ/4的NP基因序列分析
《新疆农业大学学报 》 2008 北大核心
摘要：用RT-PCR法,以1株H5N1亚型禽流感病毒新疆分离株A/Duck/XJ/4为模板,扩增了NP全基因cD-NA,克隆至T载体,并进行序列测定。序列分析结果表明:扩增的NP基因全长1 518 bp,最大的开放阅读框在18~1 514 bp,编码499个氨基酸。将A/Duck/XJ/4毒株NP基因序列与15株A型流感病毒NP基因序列进行比较,各毒株间NP基因核苷酸序列同源性81.4%~99.0%,编码的氨基酸同源性在92.8%~99.6%。
