科研产出
绵羊NICD基因的克隆、真核表达及其序列分析
《西北农业学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：采用RT-PCR技术扩增绵羊Notch基因胞内段功能结构域(NICD),将其克隆到慢病毒表达载体中,在293T细胞中对其进行真核表达,通过Western blotting鉴定其蛋白表达,进一步对NICD核酸和氨基酸序列进行分析。结果表明,首次克隆获得绵羊NICD基因,该基因序列为2 388bp(GenBank登录号为KF318190.1),编码795个氨基酸,重组蛋白分子质量为110ku左右。序列分析结果显示,核酸序列与牛、马、人和小鼠的同源性分别为96%、90%、87%和83%,进化上与牛的关系最近;蛋白序列与牛、马、人和小鼠的同源性分别为96%、90%、87%和84%,预测二级结构可能存在26个α-螺旋、13个β-折叠、66个转角和64个无规则卷曲。
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牛结核病PPD_B-P_(E-C)-IFN-γ诊断方法的建立
《中国兽医科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：对结核分枝杆菌复合群致病菌株的特异性抗原ESAT-6(PE)和CFP-10(PC)分别进行原核表达并纯化。用PPDB、PE、PC和PE-C(PE、PC等量混合)作为4种刺激抗原(以PPDB作为参照),分别体外平行刺激56份已知的牛结核病阳性牛全血和460份阴性牛全血,孵育、收获血浆,采用间接ELISA检测产生的IFN-γ水平。经统计学分析,绘制ROC曲线,分别确定PPDB-IFN-γ、PE-IFN-γ、PC-IFN-γ和PE-C-IFN-γ的阳性判定最佳临界点及其敏感性和特异性;并据此进一步分析PPDB分别与PE、PC或PE-C联用(PPDB-PEIFN-γ、PPDB-PC-IFN-γ、PPDB-PE-C-IFN-γ,串联和并联)的敏感性和特异性。结果显示,PE、PC的分子质量分别为27.8ku和16.4ku;PPDB-IFN-γ的最佳临界点为0.02,其敏感性和特异性分别为94.6%和92.2%,PE、PC、PE-C的最佳临界点相同,均为0.01,其中PE-C-IFN-γ的敏感性和特异性最高,分别为92.9%和95.7%;联用时,PPDB-PE-C-IFN-γ的敏感性和特异性最高,其串联时敏感性和特异性分别为89.3%和96.5%,并联时分别为98.2%和91.3%。PE-C-IFN-γ的敏感性比PPDB-IFN-γ低1.7%,但特异性高3.5%;PPDB-PE-C-IFN-γ并联时,敏感性比PPDB-IFN-γ高3.6%,串联时特异性比PPDB-IFN-γ高4.3%。结果表明,本试验建立的PPDB-PE-C-IFN-γ诊断方法具有高敏感性和高特异性,具有极大的应用价值。
关键词： IFN-γ 牛结核病 PPDB ESAT-6 CFP-10
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猪繁殖与呼吸综合征新疆株ORF2-7基因的克隆及序列分析
《新疆农业科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：【目的】研究新疆PRRS流行毒株的ORF2–7基因的变异及进化情况,为揭示PRRSV在新疆的流行特点提供参考,为新疆PRRS的防控提供理论依据。【方法】将新疆某规模化和散养户猪场疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的猪肺脏病料进行处理,提取病毒RNA,应用PT-PCR技术扩增出4株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF2–7基因序列,并进行序列测定。【结果】PRRSV ORF2–7基因核苷酸长度为3 206bp。序列分析表明,新疆分离株XJTK-02株、XJERG-03株、XJ-04株和XJFCH-05株之间核苷酸的同源率较高,为90.3%~98.6%;XJTK-02株与经典PRRSV CH-1a株核苷酸同源率最高为93%;而其它3株新疆分离株与高致病性PRRSV JXA1、HuN4、JXwn06、pJX143和HPBEDV苷酸同源率较高,为95.1%~98.9%;4株新疆分离株ORF2–7与美洲型代表株VR-2332核苷酸同源性为88.9%~90.5%;而与欧洲型代表株LV4.2.1的核苷酸同源性仅为54.2%~54.6%。【结论】新疆分离株为PRRSV美洲型。
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 克隆 序列分析
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中国部分重点地区牛结核病的γ-干扰素试验流行病学调查
《中国预防兽医学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：为调查部分省份牛结核病(bTB)的流行情况,我们在山东等14个省份34个历史上疫情较重的县共129个场户采集牛全血2 201份,采用CO2培养箱或蜡罐方法进行bTBγ-干扰素检测,结果显示样品的个体阳性率为6.4%,群阳性率为42.6%。饲养模式对bTB感染影响的统计显示较大规模场的个体阳性率(6.9%)和群阳性率(60%)均高于散养户(分别为5.7%和35.6%)。而牦牛样品的检测结果均为阴性。5个牛群的禽型PPD阳性统计结果显示牛型PPD阳性率越高,则禽型PPD阳性牛在牛型PPD阳性牛中的所占比率越低。在所有阳性牛群中,阳性率≥10%的牛群所占比例高达81.8%(45/55),bTB感染呈现出一个"群发性"的特征。
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12份苜蓿种质材料苗期抗旱性综合评价
《草业科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：采用室内盆栽法研究12份苜蓿(Medicago sativa)种质材料在3个土壤水分梯度下[对照(CK)、中度干旱(M)、重度干旱(S)]对干旱胁迫的响应,并通过隶属函数标准差系数赋予权重法对其进行抗旱性综合评价,为新疆地区抗旱苜蓿品种的选育提供理论依据。研究结果表明,12份苜蓿的苗期抗旱性从强到弱依次为和田大叶紫花苜蓿>敖汉紫花苜蓿>阿尔泰杂花苜蓿>甘农3号紫花苜蓿>奇台苜蓿>巴州苜蓿>沙湾苜蓿>阜康苜蓿>北疆紫花苜蓿>布尔津苜蓿>策勒苜蓿>伊犁苜蓿。
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沙棘嫩枝叶对绵羊瘤胃发酵特性和血清免疫指标的影响
《动物营养学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：本试验旨在研究沙棘嫩枝叶对绵羊瘤胃发酵特性和血清免疫指标的影响。采用单因素随机区组试验设计,选择体重为(28.0±3.5)kg的阿勒泰羔羊60只,随机分成4组,每组3个重复,每个重复5只。对照(Con)组饲喂基础饲粮,试验组以2.5%(SJZY-1组)、5.0%(SJZY-2组)和7.5%沙棘嫩枝叶(SJZY-3组)等量替换基础饲粮中麦秸。试验期63 d,其中预试期7 d,正试期56 d。在正试期第56天晨饲前,分别从各组每个重复随机选取2只,采集血样和瘤胃液。结果表明:1)SJZY-1组和SJZY-3组平均日增重显著高于Con组(P<0.05)。2)随沙棘嫩枝叶添加量的增加,瘤胃液pH呈下降趋势,组间无显著差异(P>0.05);试验组乙酸、丙酸、丁酸和总挥发性脂肪酸(TVFA)的浓度均极显著高于Con组(P<0.01),SJZY-3组最高;乙酸/丙酸和乙酸/TVFA没有显著变化(P>0.05);SJZY-2组和SJZY-3组氨态氮浓度分别显著(P<0.05)和极显著(P<0.01)低于Con组。3)与Con组相比,沙棘嫩枝叶的添加对血清CD4、白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素2(IL-2)浓度的影响为低量抑制中、高量促进,而对血清γ干扰素(γ-IFN)浓度的影响则表现为低量促进。结果提示,沙棘嫩枝叶能提高绵羊平均日增重,增加瘤胃液中挥发性脂肪酸浓度和降低氨态氮浓度,提高血清CD4、IL-1、IL-2、γ-IFN浓度;综合考虑,建议沙棘嫩枝叶在绵羊饲粮中以5.0%~7.5%添加。
关键词： 沙棘嫩枝叶 阿勒泰羊 挥发性脂肪酸 氨态氮 细胞免疫因子
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新疆羊狂犬病病毒的鉴定及N基因序列分析
《中国人兽共患病学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：目的诊断疑似羊狂犬病病例并分析其病原分子N基因遗传进化关系。方法采集新疆阿勒泰地区疑似狂犬病羊脑组织,以狂犬病病毒特异性目的基因(N基因)RT-PCR扩增和序列测定进行病毒鉴定;以DNAStar-Lasergene.v7.1软件拼接测定序列,应用BLAST软件分析N基因的遗传进化关系。结果显示本研究鉴定的狂犬病毒阳性并获得了病毒全基因序列,建立了其N基因的遗传进化关系树,确定疑似的羊狂犬病病毒与狂犬病病毒基因Ⅰ型俄罗斯C群的遗传关系较近。结论应用RT-PCR方法对羊源狂犬病进行实验室诊断,获得该病原全基因序列,明确了新疆狂犬病病原和流行地域分布,为羊狂犬病毒分子流行病学研究奠定基础。
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乌鲁木齐市犬弓形虫血清流行病学调查与分析
《中国寄生虫学与寄生虫病杂志 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：为了解新疆乌鲁木齐市家犬与流浪犬弓形虫血清流行病学情况,于2011-2012年分别从3家宠物医院和1家流浪犬收容所采集家犬和流浪犬血样308份和110份。ELISA法检测结果显示,犬血清弓形虫Ig G抗体总阳性率为31.8%(133/418),其中,家犬和流浪犬弓形虫抗体阳性率分别为29.9%(92/308)和37.3%(41/110),两者差异无统计学意义(P>0.05)。家犬中,雄性犬的阳性率为27.0%(41/152),雌性犬的阳性率为32.7%(51/156)(P>0.05);犬龄<1岁的阳性率为27.1%(32/118),1~2岁的阳性率为30.2%(29/96),>2岁的阳性率为33.3%(31/94),不同犬龄间差异无统计学意义(P>0.05)。提示乌鲁木齐市犬弓形虫血清抗体阳性率较高。
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细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因在毕赤酵母中的分泌表达及生物学功能鉴定
《中国病原生物学杂志 》 2014 CSCD
摘要：目的在毕赤酵母中分泌表达细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(Echinococcus granulosus thioredoxin peroxidase,EgTPx),并检测其抗氧化活性。方法从包囊中分离原头蚴,抽提总RNA,采用RT-PCR获取EgTPx的cDNA片段并克隆至分泌型表达载体pPIC9K,构建重组表达质粒pPIC9K-EgTPx,电穿孔法转化毕赤酵母菌株GSll5,在MD平板上筛选His+克隆,采用梯度浓度G418抗性筛选高拷贝转化子,提取酵母基因组DNA,采用PCR鉴定Mut表型,阳性克隆经甲醇诱导表达EgTPx蛋白,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定,并检测其抗氧化活性。结果酶切和测序证实重组表达质粒pPIC9K-EgTPx构建正确,表达的目的蛋白分子质量单位约为22ku,该蛋白可被鼠抗EgTPx多抗识别,且具有较强的抗氧化活性。结论在毕赤酵母表达系统中成功表达了EgTPx,该蛋白具有免疫反应性和抗氧化活性。
关键词： 细粒棘球绦虫 硫氧还蛋白过氧化物酶 毕赤酵母 分泌表达 抗氧化
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口蹄疫病毒表位嵌合蛋白在枯草芽胞杆菌中的分泌表达
《中国兽医科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：为了将口蹄疫病毒(FMDV)中和表位展示在病毒样颗粒(VLP)表面,以猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白为骨架,用FMDV O/Mya-98/2010毒株G-H环替换PCV2自身中和表位,构建嵌合衣壳蛋白CaO。为分泌表达CaO蛋白,在芽胞杆菌穿梭质粒pHCMC05的多克隆位点中顺次插入枯草芽胞杆菌P43启动子和中性蛋白酶B分泌信号肽(nprBsp),构建分泌型大肠杆菌-枯草芽胞杆菌穿梭质粒p7257-P43。然后将合成的CaO基因插入p7257-P43质粒nprBsp的下游,构建分泌表达质粒p7257-P43-CaO。将该质粒转化枯草芽胞杆菌WB800,氯霉素诱导表达。上清经SDS-PAGE检测,嵌合蛋白CaO在枯草芽胞杆菌中得到表达。Western-blot证实,该蛋白具有反应原性。免疫电镜可观察到直径约15nm±2nm的VLP,表明嵌合蛋白在体外能有效组装。
关键词： 口蹄疫病毒 表位嵌合蛋白 猪圆环病毒2型 枯草芽胞杆菌
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