科研产出
巴斯德毕赤酵母多拷贝整合表达组装禽流感病毒样颗粒
《新疆农业科学 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：[目的]构建多拷贝整合表达禽流感病毒样颗粒的重组巴斯德毕赤酵母,为H5 N1亚型禽流感基因工程疫苗提供基础.[方法]以巴斯德毕赤酵母GS115株18S rRNA基因(rDNA)部分序列,插入pPIC9K载体上XbaⅠ和Bsp1407Ⅰ位点间,构建多拷贝整合表达质粒p8K.再以禽流感病毒H5N1毒株基因组RNA为模板,RT-PCR扩增HA、M和NA基因,分别插入多拷贝载体p8K,构建表达质粒p8K-HA/M/NA.表达质粒分别扩增后线性化,按比例混合,电转化GS115感受态细胞.增菌后,经遗传霉素G418抗性平板筛选、PCR鉴定携带HA、M和NA基因序列的多拷贝整合菌株.阳性菌株增菌、诱导表达、高压均质破碎后,Western-blot检测表达产物.[结果]PCR鉴定阳性的重组菌株,其细胞裂解蛋白,免疫印迹试验可检测到与HA、M1和NA分子量一致的蛋白条带;电子显微镜可观察到大小约为80~120 nm的病毒样颗粒,免疫鸡能产生抗禽流感病毒中和抗体.[结论]重组毕赤酵母能够多拷贝整合、表达、组装禽流感病毒样颗粒.
关键词： 禽流感病毒;多拷贝整合;病毒样颗粒
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两种柽柳对盐胁迫的生理生化响应
《草食家畜 》 2021
摘要：柽柳属（Tamarix chinensis L.）植物,为多年生泌盐盐生植物,是一类重要灌木植物,具有许多独特的生物、生态学特征。本研究以刚毛柽柳（T.hispida Wild）和长穗柽柳（T.elongata Ledeb）为研究对象,采用盆栽实验,开展耐盐性实验:中性盐NaCl设置0、50、100、150和200 mmoL/L 5个浓度水平,通过测定盐胁迫下两种柽柳的光合速率、蒸腾速率、游离脯氨酸含量、干重等生理指标,结果显示:刚毛柽柳和长穗柽柳均表现出较强的耐盐能力,但刚毛柽柳受NaCl胁迫的影响较小,表明刚毛柽柳耐盐性强于长穗柽柳,可作为柽柳属植物耐盐生理和分子机制研究的备选材料。
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重组酶介导等温核酸扩增技术检测伯氏疏螺旋体方法的建立
《中国兽医杂志 》 2021 北大核心
摘要：本试验采用重组酶介导等温核酸扩增（RAA）技术建立伯氏疏螺旋体核酸的检测方法。根据伯氏疏螺旋体16S rRNA基因保守序列设计并合成特异性RAA引物,采用重组酶介导扩增技术电泳法,以10倍系列稀释1 ng/μL伯氏疏螺旋体B31基因组DNA为模板进行RAA,测定该方法的敏感性。通过对大肠杆菌、沙门菌、钩端螺旋体基因组DNA扩增验证该方法的特异性。结果显示,该方法对伯氏疏螺旋体标准株的B31基因组DNA检测限约为100 fg/μL,对大肠杆菌、沙门菌、钩端螺旋体均无扩增,具有良好的特异性。RAA具有特异性高、检测快速、灵敏等优点,本研究建立的伯氏疏螺旋体RAA检测方法,为伯氏疏螺旋体临床样本的快速诊断提供依据。
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小反刍兽疫核酸疫苗的制备及免疫效果评估
《黑龙江畜牧兽医 》 2021 北大核心
摘要：为了制备针对小反刍兽疫病毒（Peste des peties ruminants virus, PPRV）F基因的核酸疫苗,并评价其对小鼠的免疫效果,试验采用DNA重组技术将F基因、优化密码子后的F基因以及连接乙型脑炎病毒信号肽（JEVSP）的优化密码子后的F基因3个目的片段分别克隆到真核表达载体pcDNA3.1（+）,构建重组质粒pcDNA3.1（+）-F、pcDNA3.1（+）-F-opt和pcDNA3.1（+）-JEVSP-F-opt,大量培养重组质粒菌后,以碱裂解法将菌体悬浮裂解,经中空纤维切向流超滤和微滤浓缩处理,将制备的核酸疫苗以100μg/只的剂量给Balb/c小鼠肌肉注射免疫,共分为4组,pcDNA3.1（+）-F组、pcDNA3.1（+）-F-opt组、pcDNA3.1（+）-JEVSP-F-opt组和pcDNA3.1（+）空载体组,每隔14 d免疫1次,共免疫3次,每次免疫14 d后利用中和试验检测抗体水平。结果表明:成功制备核酸疫苗pcDNA3.1（+）-F、pcDNA3.1（+）-F-opt和pcDNA3.1（+）-JEVSP-F-opt,免疫Balb/c小鼠14 d后pcDNA3.1（+）空载体免疫组中和抗体阳性率为0,pcDNA3.1（+）-F组、pcDNA3.1（+）-F-opt组、pcDNA3.1（+）-JEVSP-F-opt组抗体转阳性,且pcDNA3.1（+）-F-opt组、pcDNA3.1（+）-JEVSP-F-opt组抗体水平呈逐渐增加的趋势。说明成功制备小反刍兽疫核酸疫苗,并且能在小鼠上产生抗体。
关键词： 小反刍兽疫 F基因 核酸疫苗 制备工艺 浓缩 免疫水平
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北山羊与绒山羊杂交F1代DQA1基因外显子2多态性与CDS区生物信息学分析
《黑龙江畜牧兽医 》 2021 北大核心
摘要：为了解北山羊杂交后代DQA1基因序列特征,以及DQA1基因多态性与血液免疫性状的关系,筛选出用于北山羊杂交后代抗病育种的遗传标记,试验通过PCR扩增和测序获得了北山羊与家养绒山羊杂交F1代DQA1基因CDS区,并对CDS区编码蛋白进行了生物信息学预测分析,同时采用限制性片段长度多态性（RFLP）分析DQA1基因外显子2的多态性,并与血液免疫性状进行了相关分析。结果表明:杂交F1代DQA1基因外显子2经AluⅠ酶切后共检出3种基因型,其中AC型白细胞和淋巴细胞数量显著高于BB型（P<0.05）,AB型血红蛋白浓度显著高于BB型（P<0.05）;DQA1基因CDS区长度为768 bp,编码255个氨基酸,表现为弱的亲水性,第23,24位氨基酸存在信号肽剪切位点,第218～240位有一个典型的跨膜螺旋区,二级结构主要由α-螺旋（16.08%）、β-折叠（25.49%）和无规卷曲（58.43%）组成。说明DQA1基因AC基因型与血液白细胞和淋巴细胞总数具有一定的相关性,其编码蛋白的生物信息学预测与其功能相一致,可作为抗病育种的遗传标记。
关键词： 北山羊 绒山羊 杂交F1代 DQA1 多态性 蛋白序列分析 生物信息学
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东方山羊豆种子生产技术要点
《中国畜禽种业 》 2021
摘要：东方山羊豆又名饲用山羊豆,是一种国外引进的豆科山羊豆属多年生直立型、根蘖型豆科牧草,具有较高的饲用价值.东方山羊豆的良种生产对该牧草的产业化应用推广具有重要现实意义.本文主要阐述了东方山羊豆种子生产技术要点,内容主要涉及种子生产适宜区和田块选择、播种关键技术要求、田间管理措施及种子收获、清选加工与贮藏,对东方山羊豆种子生产具有一定的指导作用.
关键词： 东方山羊豆;种子生产;牧草
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浅谈影响骑乘马调教效果的因素
《黑龙江动物繁殖 》 2021
摘要：为了提高骑乘马调教效果、明确适合伊犁地区的骑乘马调教方案,试验在伊犁地区昭苏县畜牧兽医站卡拉苏马研究中心随机选择15匹体重接近、正处于调教训练期的健康青年英纯血杂交一代马,采用智能信息采集系统,对比分析上下午时间安排、调教时长、年龄、训练师、马精神状态、采食量、饮水对调教效果的影响。结果表明:骑乘马训练夏季以早晚各0.5 h慢跑为宜;春秋季训练以早晨采食0.5 h后,不超过1.0 h慢跑为宜。下午给骑乘马刷拭、日光浴,不做疾跑及其他剧烈运动。调教马平均每天摄取精料4.5 kg、青干草量10.0 kg,非调教马精料3.0 kg、青干草14.0 kg。
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高寒旱地区塔什库尔干羊同期发情及受胎效果分析
《安徽农业科学 》 2021
摘要：为提高塔什库尔干羊的繁殖效果,并探索塔什库尔干羊同期发情处理方法,研究了PG+PG、CIDR+PMSG等同期发情处理方法对塔什库尔干羊初产母羊发情效果及受胎率的影响。结果表明,不同处理组的同期发情期时间均集中在处理后25～48 h; 3个处理组间同期发情率差异极显著（P<0.01）,2个试验组同期处理发情率极显著高于对照组（P<0.01）,其中CIDR+PMSG处理组发情效果最好。CIDR+PMSG处理组发情母羊的受胎率为80%,略高于PG+PG处理组的受胎率（P>0.05）。该研究结果表明CIDR+PMSG同期发情处理方法可以有效提高塔什库尔干羊的发情率和受胎率。
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