口蹄疫病毒非结构蛋白3AB、3A基因的克隆与原核表达

张先锋; 易忠; 魏玉荣; 胡尔玛西; 符子华; 《新疆农业大学学报 》 2010 北大核心

摘要：以构建的口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC质粒pGEM-T-3ABC为模板,设计了特异性的引物,进行RT-PCR扩增得到非结构蛋白3AB、3A基因,然后分别定向克隆到原核表达载体pET-28a、pET-41a载体上,将重组质粒转化宿主菌BL21,IPTG诱导表达目的蛋白。表达产物经SDS-PAGE和Western blotting检测,证明重组蛋白在大肠杆菌中成功表达。

关键词： 口蹄疫病毒 非结构蛋白 克隆 表达

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鸡传染性支气管炎病毒XJ株N基因的克隆表达及抗原性初步鉴定

齐晓亮; 夏俊; 成进; 陆桂丽; 沙依兰古丽; 汪萍; 《新疆农业大学学报 》 2010 北大核心

摘要：根据发表的鸡传染性支气管炎病毒N基因序列设计一对引物,经RT-PCR扩增得到1 230 bp DNA片段,将其克隆到表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-N,经测序鉴定正确后,将其转化感受态细胞E.coliBL21(DE3),并进行IPTG诱导表达,结果表明,重组菌可表达分子质量为50 kD的融合蛋白。Western-blotting结果显示,该重组蛋白能与IBV阳性血清发生特异性的免疫印迹反应,表明该重组蛋白具有良好的免疫原性。

关键词： 鸡传染性支气管炎病毒 N基因 克隆表达 免疫印迹

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绵羊Follistatin基因表达及其结构域的功能分析

张宁; 张雪梅; 刘明军; 谭立新; 《生物工程学报 》 2010 北大核心 CSCD

摘要：为研究羊Follistatin基因的功能,提取了绵羊卵巢总RNA,通过RT-PCR方法获得羊FollistatincDNA的完整开放阅读框(1038bp)。去除信号肽序列后与原核表达载体pET41a连接,构建重组表达质粒pFSsig-,经大肠杆菌诱导表达获得FSsig-蛋白(66kDa)。通过RT-PCR克隆了包含N端和结构域1的Follistatin突变体(FSN+D1),将FSN+D1片段插入慢病毒载体(pLEX-MCS)构建了pFS-N+D1慢病毒重组表达质粒。在293T细胞中进行慢病毒的包装,再感染绵羊肌肉原代细胞,得到稳定表达FSN+D1的肌肉细胞系,通过细胞生长曲线结果显示稳定表达FSN+D1的肌肉细胞明显比正常肌肉细胞增殖快,且差异极显著(P<0.01),表明绵羊FSN+D1结构域有促进肌肉细胞生长的功能。

关键词： 绵羊Follistatin基因 原核表达 慢病毒 细胞生长曲线

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口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC基因的克隆与原核表达

张先锋; 易忠; 魏玉荣; 符子华; 胡尔玛西; 《草食家畜 》 2010

摘要：以亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)为研究对象,通过逆转录并进行PCR扩增得到非结构蛋白3ABC基因,然后定向克隆到原核表达载体PET-32a,重组质粒PET-3abc转化宿主菌BL21,IPTG诱导表达目的蛋白。表达产物经SDS-PAGE检测,证明重组蛋白PET-32a-3ABC成功在大肠杆菌中表达。以表达产物作为抗原,为鉴别诊断自然感染和免疫动物的方法提供了技术条件。

关键词： 口蹄疫病毒 非结构蛋白 克隆 表达

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牛结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的原核表达和纯化

徐志光; 许礼义; 呼西旦; 宋振忠; 徐敏; 《草食家畜 》 2010

摘要：构建牛结核分枝杆菌ESAT-6基因的原核表达载体,诱导表达、纯化并初步鉴定该蛋白。方法:以牛型分枝杆菌基因组DNA为模板,PCR方法扩增ESAT-6基因,产物通过双酶切克隆入pET-22b(+)质粒,经PCR、酶切、测序等方法鉴定后,转入大肠杆菌BL21(DE3)polys菌体,经IPTG诱导表达蛋白;利用Western-blot鉴定重组蛋白后,纯化目的蛋白。结果:所获得ESAT-6基因序列与GenBank公布的完全一致。经SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定均发现在6kDa处有特异性蛋白条带。纯化的蛋白的大小与蛋白质分子量标准比较一致。结论:成功表达纯化并鉴定构建了ESAT-6融合蛋白。

关键词： 牛分枝杆菌 ESAT-6 表达 纯化

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母源基因Gdf9、Zar1、Mater和Dnmt1 mRNA在绵羊卵母细胞和早期胚胎中的表达

侯敏; 林嘉鹏; 白洁; 赵云程; 汪立琴; 陈世彬; 叶小芳; 黄俊成; 《中国草食动物 》 2010

摘要：为探讨母源基因在绵羊卵母细胞和胚胎发育过程中的表达模式,运用Real-time PCR技术研究4种母源基因:Gdf9(生长分化因子9)、Zar1(合子阻泄因子)、Mater(胚胎必要的母体抗原)及Dnmt1(DNA甲基化转移酶1)的mRNAs在绵羊GV期卵母细胞,24h成熟卵母细胞,2-细胞、4-细胞、8-细胞、16-细胞胚胎以及囊胚中的含量变化情况。结果表明:在GV期卵中Zar1、Mater、Gdf9以及Dnmt1m RNA相对含量最高(P<0.05);从2-细胞胚胎开始,4种基因的mRNA相对含量显著降低(P<0.05),各基因mRNA的含量在不同发育阶段的卵母细胞和胚胎中存在动态变化,这对卵子生长和胚胎发育有重要意义。

关键词： 卵母细胞成熟 早期胚胎发育 母源基因 实时定量PCR 基因表达

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IPTG诱导浓度、时间对AsiaⅠ型口蹄疫病毒VP1蛋白表达的影响

魏婕; 易忠; 魏玉荣; 王海烽; 胡尔玛西; 符子华; 冉多良; 《中国畜牧兽医 》 2009 北大核心

摘要：将口蹄疫病毒VP1基因插入原核表达载体pET-28a中,转化至大肠杆菌BL21。用不同的IPTG浓度与不同诱导时间诱导菌株表达VP1蛋白,分析不同IPTG浓度及不同诱导时间对蛋白表达量的影响,以确定最佳表达条件。结果表明,在一定范围内,随IPTG浓度的增高,表达量并不会随之增大;而在菌体对数生长期内,随诱导时间的延长,表达量会随之增大。最后确定当IPTG浓度为3 mmol/L,诱导表达到最长时间9 h时,VP1蛋白表达量最大。

关键词： 口蹄疫病毒 AsiaⅠ型 VP1蛋白 表达 IPTG 诱导浓度 诱导时间

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犬抗细粒棘球绦虫疫苗候选蛋白EgM9的原核表达及纯化

古努尔·吐尔逊; 郭宝平; 张壮志; 赵莉; 石保新; 吐尔洪·依米提; 哈斯也提·艾力; 王进成; 米小云; 刘斌; 张文宝; 《中国动物传染病学报 》 2009

摘要：把含有EgM9基因的质粒pET-41b转化至大肠杆菌BL-21中,IPTG诱导重组质粒的表达,亲和层析纯化表达产物,用SDS-PAGE和Western blot进行分析鉴定,显示分离纯化的EgM9和GST蛋白纯度较高,1L的培养物约可以得到5mg纯化蛋白,分子量为60kDa。EgM9免疫后的血清与成熟虫体蛋白有特异性反应。融合蛋白获得高效表达,并成功纯化,初步实验证明EgM9具有良好的免疫原性,可进一步用于疫苗的免疫实验。

关键词： 细粒棘球绦虫 EgM9 疫苗候选蛋白 表达

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O型口蹄疫病毒VP1基因在2种原核表达载体上的表达

王海烽; 易忠; 魏玉荣; 胡尔马西; 符子华; 《中国畜牧兽医 》 2009 北大核心

摘要：设计1对引物将口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)VP1基因克隆到T载体上,通过NdeI和XhoI双酶切VP1基因和pET-28(a),在T4连接酶的作用下构建重组表达载体pET-28a-VP1;然后用EcoR I和XhoI双酶切VP1基因与pET-41(a),在T4连接酶的作用下构建重组表达载体pET-41a-VP1;然后将这2个新构建的载体分别通过热冲击法转化BL21(DE3),37℃不同IPTG浓度和32℃、0.01 mmol/L IPTG诱导表达,SDS-PAGE结果显示pET-28a-VP1的表达量高于pET-41a-VP1,在DTT和乙醇的作用下,二者均没有可溶性蛋白出现。

关键词： 口蹄疫病毒 VP1基因 原核表达 载体

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羊BLG基因5′和3′调控区克隆及其调控GFP基因在乳腺细胞的表达

刘明军; 李文蓉; 武坚; 黄俊成; 郭志勤; 曲新勇; Paul Kroon; 《生物工程学报 》 2002 北大核心 CSCD

关键词： 羊乳球蛋白 基因克隆 绿色荧光蛋白 乳腺细胞系 表达

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