科研产出
FGF5基因编辑细毛羊的健康状况评估
《草食家畜 》 2021
摘要：动物的健康状况是转基因动物生物安全评价的重要内容之一,而动物的生长发育和生理指标是评估其健康状况的有效手段。课题组前期利用CRISPR/Cas9技术获得了一批成纤维生长因子5（Fibroblast growth factor 5,FGF5）基因功能缺失的中国美利奴细毛羊。为了评估FGF5基因编辑细毛羊的健康状况和生物安全性,本试验对FGF5基因编辑细毛羊与野生型对照羊群体的生长发育性状、血液生理生化指标以及肠道微生物群落结构进行了比较和分析。结果显示:（1）FGF5基因编辑羔羊的0、2、4、6、8月龄的体重、体高、胸围、斜体长与同龄野生型细毛羊无显著差异（P>0.05）;（2）不论是羔羊时期还是成年时期,FGF5基因编辑羊的红细胞、白细胞、血小板等15项血常规指标和肾功能、肝功能、醣类代谢、电解质等10项血清生化指标与野生型对照羊相比,二者均无显著差异（P>0.05）;（3）利用16S rDNA微生物群落测序技术分析FGF5基因编辑羊与野生型对照羊肠道微生物群落结构。结果显示,在门水平分布中拥有共享优势菌比例达96.2%;α多样性指数差异分析结果显示,二者无显著差异（P>0.05）;基因编辑羊与野生型对照羊的PCA图均可以看到明显的聚类;LEfSe分析显示,基因编辑羊有2个生物标记,野生型对照羊有2个生物标记,均为反刍动物肠道内常见菌群。研究表明,FGF5基因功能的缺失未对细毛羊的自身健康造成不利影响。研究结果为FGF5基因编辑细毛羊生物安全评价奠定了基础。
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新疆野生老芒麦种质资源形态及生长特性分析
《草地学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：为了探究新疆不同区域野生老芒麦（Elymus20sibiricus）种质资源的形态特征及生态适应性,本研究在新疆呼图壁试验区,以14份老芒麦为材料,跟踪其株高动态变化,分析生长速率与试验区环境因子的相关性,统计20个数量性状的变异系数,并对27个表型性状进行聚类和主成分分析。结果表明:哈密和伊犁地区老芒麦的生态幅宽、可塑性强,而阿勒泰和博乐地区种质生态幅相对较窄;按照株高动态变化将14份种质归为早、中、晚期3种生长类型;数量性状变异系数较大的是蜡熟期旗叶至穗基部长度和穗轴第1节间长;聚类分析将14份种质划分成5组,第1组和第3组具有生殖枝长、草层高、叶片长且宽、小穗数多等优良特性。前7个主成分的累计贡献率为89.16%,其中第1主成分与种子产量的关系密切,第2主成分与牧草产量存在相关性。本研究结果可为新疆野生老芒麦的驯化栽培与品种选育提供理论基础。
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新疆地方绵羊品种Cytb基因遗传多样性与系统进化分析
《西南农业学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：【目的】为全面了解新疆地方绵羊品种的遗传多样性和系统发育关系,为后期选种、保种和种质资源合理利用提供理论依据。【方法】对新疆13个地方绵羊品种线粒体DNA细胞色素b（cytochrome b, cytb）基因序列进行PCR扩增和测序分析。【结果】除和田羊外,其余12个品种遗传多样性均较丰富;中性检验显示和田羊经历过种群扩张;遗传距离和聚类分析显示和田羊与策勒黑羊遗传距离最近,与巴尔楚克羊遗传距离最远,其它品种与巴尔楚克羊的遗传距离均较远;单倍型网络图分析显示,13个地方品种分为3个分支;分子方差分析表明,群体内变异占91.33%,群体间变异占8.67%,品种间分化不明显。【结论】新疆13个地方绵羊品种有3个母系起源,其亲缘关系与育成史和地理分布基本一致,和田羊的遗传多样性较低,需要加强遗传资源保护。
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巴斯德毕赤酵母多拷贝整合表达组装禽流感病毒样颗粒
《新疆农业科学 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：[目的]构建多拷贝整合表达禽流感病毒样颗粒的重组巴斯德毕赤酵母,为H5 N1亚型禽流感基因工程疫苗提供基础.[方法]以巴斯德毕赤酵母GS115株18S rRNA基因(rDNA)部分序列,插入pPIC9K载体上XbaⅠ和Bsp1407Ⅰ位点间,构建多拷贝整合表达质粒p8K.再以禽流感病毒H5N1毒株基因组RNA为模板,RT-PCR扩增HA、M和NA基因,分别插入多拷贝载体p8K,构建表达质粒p8K-HA/M/NA.表达质粒分别扩增后线性化,按比例混合,电转化GS115感受态细胞.增菌后,经遗传霉素G418抗性平板筛选、PCR鉴定携带HA、M和NA基因序列的多拷贝整合菌株.阳性菌株增菌、诱导表达、高压均质破碎后,Western-blot检测表达产物.[结果]PCR鉴定阳性的重组菌株,其细胞裂解蛋白,免疫印迹试验可检测到与HA、M1和NA分子量一致的蛋白条带;电子显微镜可观察到大小约为80~120 nm的病毒样颗粒,免疫鸡能产生抗禽流感病毒中和抗体.[结论]重组毕赤酵母能够多拷贝整合、表达、组装禽流感病毒样颗粒.
关键词： 禽流感病毒;多拷贝整合;病毒样颗粒
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两种柽柳对盐胁迫的生理生化响应
《草食家畜 》 2021
摘要：柽柳属（Tamarix chinensis L.）植物,为多年生泌盐盐生植物,是一类重要灌木植物,具有许多独特的生物、生态学特征。本研究以刚毛柽柳（T.hispida Wild）和长穗柽柳（T.elongata Ledeb）为研究对象,采用盆栽实验,开展耐盐性实验:中性盐NaCl设置0、50、100、150和200 mmoL/L 5个浓度水平,通过测定盐胁迫下两种柽柳的光合速率、蒸腾速率、游离脯氨酸含量、干重等生理指标,结果显示:刚毛柽柳和长穗柽柳均表现出较强的耐盐能力,但刚毛柽柳受NaCl胁迫的影响较小,表明刚毛柽柳耐盐性强于长穗柽柳,可作为柽柳属植物耐盐生理和分子机制研究的备选材料。
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重组酶介导等温核酸扩增技术检测伯氏疏螺旋体方法的建立
《中国兽医杂志 》 2021 北大核心
摘要：本试验采用重组酶介导等温核酸扩增（RAA）技术建立伯氏疏螺旋体核酸的检测方法。根据伯氏疏螺旋体16S rRNA基因保守序列设计并合成特异性RAA引物,采用重组酶介导扩增技术电泳法,以10倍系列稀释1 ng/μL伯氏疏螺旋体B31基因组DNA为模板进行RAA,测定该方法的敏感性。通过对大肠杆菌、沙门菌、钩端螺旋体基因组DNA扩增验证该方法的特异性。结果显示,该方法对伯氏疏螺旋体标准株的B31基因组DNA检测限约为100 fg/μL,对大肠杆菌、沙门菌、钩端螺旋体均无扩增,具有良好的特异性。RAA具有特异性高、检测快速、灵敏等优点,本研究建立的伯氏疏螺旋体RAA检测方法,为伯氏疏螺旋体临床样本的快速诊断提供依据。
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小反刍兽疫核酸疫苗的制备及免疫效果评估
《黑龙江畜牧兽医 》 2021 北大核心
摘要：为了制备针对小反刍兽疫病毒（Peste des peties ruminants virus, PPRV）F基因的核酸疫苗,并评价其对小鼠的免疫效果,试验采用DNA重组技术将F基因、优化密码子后的F基因以及连接乙型脑炎病毒信号肽（JEVSP）的优化密码子后的F基因3个目的片段分别克隆到真核表达载体pcDNA3.1（+）,构建重组质粒pcDNA3.1（+）-F、pcDNA3.1（+）-F-opt和pcDNA3.1（+）-JEVSP-F-opt,大量培养重组质粒菌后,以碱裂解法将菌体悬浮裂解,经中空纤维切向流超滤和微滤浓缩处理,将制备的核酸疫苗以100μg/只的剂量给Balb/c小鼠肌肉注射免疫,共分为4组,pcDNA3.1（+）-F组、pcDNA3.1（+）-F-opt组、pcDNA3.1（+）-JEVSP-F-opt组和pcDNA3.1（+）空载体组,每隔14 d免疫1次,共免疫3次,每次免疫14 d后利用中和试验检测抗体水平。结果表明:成功制备核酸疫苗pcDNA3.1（+）-F、pcDNA3.1（+）-F-opt和pcDNA3.1（+）-JEVSP-F-opt,免疫Balb/c小鼠14 d后pcDNA3.1（+）空载体免疫组中和抗体阳性率为0,pcDNA3.1（+）-F组、pcDNA3.1（+）-F-opt组、pcDNA3.1（+）-JEVSP-F-opt组抗体转阳性,且pcDNA3.1（+）-F-opt组、pcDNA3.1（+）-JEVSP-F-opt组抗体水平呈逐渐增加的趋势。说明成功制备小反刍兽疫核酸疫苗,并且能在小鼠上产生抗体。
关键词： 小反刍兽疫 F基因 核酸疫苗 制备工艺 浓缩 免疫水平
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北山羊与绒山羊杂交F1代DQA1基因外显子2多态性与CDS区生物信息学分析
《黑龙江畜牧兽医 》 2021 北大核心
摘要：为了解北山羊杂交后代DQA1基因序列特征,以及DQA1基因多态性与血液免疫性状的关系,筛选出用于北山羊杂交后代抗病育种的遗传标记,试验通过PCR扩增和测序获得了北山羊与家养绒山羊杂交F1代DQA1基因CDS区,并对CDS区编码蛋白进行了生物信息学预测分析,同时采用限制性片段长度多态性（RFLP）分析DQA1基因外显子2的多态性,并与血液免疫性状进行了相关分析。结果表明:杂交F1代DQA1基因外显子2经AluⅠ酶切后共检出3种基因型,其中AC型白细胞和淋巴细胞数量显著高于BB型（P<0.05）,AB型血红蛋白浓度显著高于BB型（P<0.05）;DQA1基因CDS区长度为768 bp,编码255个氨基酸,表现为弱的亲水性,第23,24位氨基酸存在信号肽剪切位点,第218～240位有一个典型的跨膜螺旋区,二级结构主要由α-螺旋（16.08%）、β-折叠（25.49%）和无规卷曲（58.43%）组成。说明DQA1基因AC基因型与血液白细胞和淋巴细胞总数具有一定的相关性,其编码蛋白的生物信息学预测与其功能相一致,可作为抗病育种的遗传标记。
关键词： 北山羊 绒山羊 杂交F1代 DQA1 多态性 蛋白序列分析 生物信息学
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