科研产出
鸽圆环病毒新疆株全基因组克隆与序列分析
《塔里木大学学报 》 2021
摘要：采用PCR扩增与基因序列测定方法从病死鸽肝组织扩增获得鸽圆环病毒（Pigeon circovirus,PiCV）新疆株（命名为XJ1株）全基因组序列,并对其基因组组成、结构及遗传进化关系进行分析,结果显示,XJ1株基因组全长为2 031 bp,存在ORF V1（41～994 nt）、ORF C1（1 166～1 981 nt）、ORF C2（410～790 nt）、ORF C3（2～292 nt）和ORF C4（739～984 nt）5个阅读框,5’端和3’端基因间隔区长度分别为90 nt和171 nt。XJ1与已报道的24株鸽圆环病毒全基因组序列同源性为87.2%～94.9%,其中与GF17和GH1834的同源性最高（均为94.9%）,基于基因遗传进化树显示,XJ1株与Cap蛋白起始密码子"ATG"分支中GF82、JF007及GH1834亲缘关系最近。鸽圆环病毒新疆株全基因组序列的分析为疫苗开发提供资料参考。
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绵羊副结核病的病原学检测与分析
《新疆农业科学 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：【目的】确诊一例疑似绵羊副结核分枝杆菌感染的病原学特征。【方法】将送检病料(肠系膜淋巴结)涂片、抗酸染色后进行显微镜观察;同时,提取肠系膜淋巴结组织DNA,采用PCR扩增副结核分支杆菌的IS900基因及亚型分型基因,并进行序列测定与分析。【结果】组织涂片染色镜检后可见抗酸染色阳性菌株;IS900基因及亚型分型基因的检测和序列分析结果表明,目标菌株为Ⅱ型(牛型)副结核分支杆菌。【结论】采用镜检及分子检测等手段确定从所送检绵羊肠系膜淋巴结组织为Ⅱ型(牛型)副结核分支杆菌感染样本。
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绵羊痘病毒新疆株的分离及结构蛋白P32基因序列分析
《新疆农业科学 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：【目的】对绵羊痘病毒当地流行毒株的分离和其结构蛋白P32基因的克隆和序列进行分析,明确引起新疆本地绵羊流行痘病的病毒种类,掌握当前流行毒株的变异情况,为绵羊痘的预防控制及将来研制高效安全疫苗提供科学依据。【方法】将两例疑似患有羊痘的绵羊肺脏组织病料接种于MDBK细胞进行病毒分离,细胞病变组织经处理后通过电子显微镜观察分离病毒。以分离病毒基因组DNA为模板,通过PCR扩增绵羊痘病毒结构蛋白P32基因,并对目的基因进行克隆和基因序列和蛋白生物信息学分析。【结果】两例病料组织接种MDBK细胞后均产生明显的细胞病变,电子显微镜观察可见到约200 nm大小、椭圆形有囊膜的典型痘病毒粒子。对两株病毒表面膜结构蛋白P32基因PCR扩增均可获得与预期大小一致的约972 bp片段,氨基酸序列分析表明分离毒株SPV/Miquang/2013和SPV/Kuche/2013病毒P32基因与绵羊痘病毒参考株同源性分别达96.9%~99.4%和97.5%~100%,生物信息学分析发现SPV/Miquang/2013株P32蛋白有两个关键氨基酸位点发生变异,即第78位谷氨酸突变为赖氨酸,第293位异亮氨酸突变为苏氨酸。【结论】从疑似病例中分离到两株病毒,通过电镜观察及P32基因扩增测序,与其他羊痘病毒比对后鉴定分离毒株为绵羊痘病毒,分别命名为SPV/Miquan/2013和SPV/Kuche/2013。SPV/Miquan/2013的P32蛋白同其他绵羊痘病毒的两个氨基酸位点发生明显突变。
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绵羊NICD基因的克隆、真核表达及其序列分析
《西北农业学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：采用RT-PCR技术扩增绵羊Notch基因胞内段功能结构域(NICD),将其克隆到慢病毒表达载体中,在293T细胞中对其进行真核表达,通过Western blotting鉴定其蛋白表达,进一步对NICD核酸和氨基酸序列进行分析。结果表明,首次克隆获得绵羊NICD基因,该基因序列为2 388bp(GenBank登录号为KF318190.1),编码795个氨基酸,重组蛋白分子质量为110ku左右。序列分析结果显示,核酸序列与牛、马、人和小鼠的同源性分别为96%、90%、87%和83%,进化上与牛的关系最近;蛋白序列与牛、马、人和小鼠的同源性分别为96%、90%、87%和84%,预测二级结构可能存在26个α-螺旋、13个β-折叠、66个转角和64个无规则卷曲。
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猪繁殖与呼吸综合征新疆株ORF2-7基因的克隆及序列分析
《新疆农业科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：【目的】研究新疆PRRS流行毒株的ORF2–7基因的变异及进化情况,为揭示PRRSV在新疆的流行特点提供参考,为新疆PRRS的防控提供理论依据。【方法】将新疆某规模化和散养户猪场疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的猪肺脏病料进行处理,提取病毒RNA,应用PT-PCR技术扩增出4株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF2–7基因序列,并进行序列测定。【结果】PRRSV ORF2–7基因核苷酸长度为3 206bp。序列分析表明,新疆分离株XJTK-02株、XJERG-03株、XJ-04株和XJFCH-05株之间核苷酸的同源率较高,为90.3%~98.6%;XJTK-02株与经典PRRSV CH-1a株核苷酸同源率最高为93%;而其它3株新疆分离株与高致病性PRRSV JXA1、HuN4、JXwn06、pJX143和HPBEDV苷酸同源率较高,为95.1%~98.9%;4株新疆分离株ORF2–7与美洲型代表株VR-2332核苷酸同源性为88.9%~90.5%;而与欧洲型代表株LV4.2.1的核苷酸同源性仅为54.2%~54.6%。【结论】新疆分离株为PRRSV美洲型。
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 克隆 序列分析
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绵羊激活素受体IIB(ActRIIB)基因的克隆、序列分析及原核表达
《Agricultural Science & Technology 》 2014
摘要：[目的]旨在克隆绵羊激活素受体IIB(ActRIIB)基因,并构建原核表达载体进行体外表达,为进一步验证功能奠定基础。[方法]以绵羊肝脏组织为材料,以提取总RNA反转录得到的cDNA为模板,利用同源序列克隆技术,对绵羊ActRIIB基因的cDNA全长进行克隆,并对其进行生物信息学分析。再根据克隆序列设计引物,将其与原核表达载体pET41a连接,构建重组表达质粒pET41a-ActRIIB,经IPTG诱导后进行表达鉴定。[结果]扩增获得绵羊ActRIIB基因cDNA全长1 564 bp(Genbank登陆号为:JX422071.1),最大开放阅读框为1 539 bp,共编码512个氨基酸;其氨基酸序列与牛的同源性最高(99.6%),ActRIIB的C末端区域高度同源且属于TGFβ家族。原核诱导表达获得符合预期大小(约92 kD)并带有组氨酸标签序列的ActRIIB重组蛋白。[结论]绵羊ActRIIB基因的克隆和表达为进一步研究其生物学功能奠定了基础。
关键词： 绵羊 激活素受体IIB基因 序列分析 原核表达
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泰勒焦虫表面抗原TaSP、spag-1和Tams1基因片段克隆与序列分析
《草食家畜 》 2014
摘要：为了解泰勒焦虫表面抗原基因特性,利用PCR方法对实验室保存的泰勒焦虫细胞表面抗原spag-1、Tams1和TaS部分基因片段进行克隆与序列分析。PCR结果显示所扩增的spag-1、Tams1和TaSP部分基因长度分别为372bp,324bp和321bp。系统发育树分析表明,与本次测序表面抗原TaSP和Tams1基因片段同源性最高的虫株登录号分别为FJ895154和AF214797的泰勒焦虫株,同源性分别高达100%与99.69%;与spag-1基因片段同源性最高的虫株登录号为X78188、XM949884和M63017,它们之间同源性为100%。
关键词： 泰勒焦虫 TaSP spag-1 Tams1 克隆 序列分析
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新疆猪繁殖与呼吸综合征病毒分离鉴定及其Nsp2和ORF5基因遗传变异分析
《广东农业科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：为探索新疆猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的变异特征,利用RT-PCR、ORF5和部分NSP2基因序列进行分析,鉴定从新疆某猪场疑似猪高热病死亡猪肺脏分离出的一株病毒。分离的病毒株被鉴定为PRRSV美洲型,命名为XJ-Q株。该株病毒与香港分离株HK13亲缘关系最近,与国内变异株(HUB1和JXA1)同源性较为亲近。与美洲型标准毒株VR-2332相比,该分离株在481位和532~560位共有30个氨基酸缺失;与国内分离的PRRSV变异株相比,在487~489位有3个氨基酸的独特缺失。结果表明,新疆分离株为PRRSV美洲型,属于新缺失的PRRSV毒株。
关键词： 猪繁殖与呼吸道综合征病毒(PRRS) ORF5基因 Nsp2基因 序列分析
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中国美利奴羊BMP4基因的克隆、序列分析与真核表达
《石河子大学学报(自然科学版) 》 2014
摘要：本实验利用RT-PCR技术获得妊娠105 d胎羊皮肤组织c DNA,PCR扩增获得中国美利奴羊BMP4基因全长编码区序列(CDS),将其克隆到zero PCR@TM-Blunt载体进行测序验证。获得的BMP4基因亚克隆至pc DNA3.1载体,构建绵羊BMP4真核表达载体,经脂质体2000转染293T细胞进行BMP4重组蛋白表达,Western blot鉴定表达产物。结果表明:中国美利奴羊BMP4基因编码区包含1227 bp,编码409个氨基酸,与其它哺乳动物氨基酸相似性达到92%,其成熟肽羧基末端区域具有TGFβ家族保守区结构。Western blot结果显示,重组蛋白分子量约为47KD,与预期一致,并证实人源BMP4单克隆抗体能够应用于羊BMP4研究。这为进一步的研究奠定了必要基础。
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