科研产出
重组pET30a-EgM9蛋白高免兔血清对体外培养细粒棘球绦虫发育的影响
《动物医学进展 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：探究egM9基因在细粒棘球绦虫性成熟发育过程中的调控机制。利用重组pET30a-EgM9蛋白高免血清对细粒棘球绦虫进行体外干预试验，观察干预后虫体的发育情况。在体外培养模型中，用pET30a-EgM9蛋白高免兔血清作用于体外培养30 d的虫体，通过Western blot检测虫体蛋白的免疫反应性，RT-qPCR分析虫体中EgM9基因的表达水平。显微观察表明经高免血清干预后虫体明显向成囊方向发育。Western blot直接法表明高免兔血清可以与虫体蛋白形成复合物，间接法证明EgM9多克隆鼠血清未与上述复合物发生抗原抗体特异性结合。RT-qPCR验证EgM9高免兔血清可刺激虫体中的EgM9基因的表达。说明通过高免血清体外干预，可促进EgM9在基因和转录水平上的表达，为筛选细粒棘球绦虫终末宿主疫苗候选基因提供理论依据。
全文链接
请求原文
犬细粒棘球绦虫抗原ELISA检测方法的建立
《畜牧与兽医 》 2024 北大核心
摘要：旨在建立敏感特异的犬细粒棘球绦虫(Eg)抗原ELISA检测方法。用细粒棘球绦虫表膜抗原(EgSfAg)免疫兔获得抗血清，同时利用抗EgSfAg杂交瘤细胞株4E8制备单抗，通过亲和层析获得纯化的多抗和单抗4E8,制备Eg、多房棘球绦虫、泡状带绦虫、多头绦虫和犬弓首蛔虫等5种蠕虫抗原作为特异性质控样品，利用单抗4E8进行Western blot检测，通过人工感染犬结合氢溴酸槟榔碱下泄法制备阳性对照样品，同时设置敏感性质控样品和阴性对照样品，构建样品盘，以多抗为捕捉抗体，HRP标记的单抗4E8为检测抗体，建立犬Eg抗原ELISA检测方法，并验证该方法的敏感性和特异性。结果：Western blot检测证明单抗4E8仅与EgSfAg有特异性反应；建立的ELISA检测方法最低检出量为1∶512;对130份阳性样品的平均检出率为95.38%;交叉试验结果显示仅EgSfAg结果为阳性；检测150份阴性样品的平均符合率为95.56%。综上，建立的ELISA方法具有较好敏感性和特异性，为终末宿主棘球蚴病的诊断和流行病学调查提供了一种安全、简便、高效的免疫学检测方法。
关键词： 细粒棘球绦虫 抗原 单克隆抗体 ELISA 样品盘
全文链接
请求原文
细粒棘球绦虫体外不同发育时期EgM9基因差异表达研究
《中国人兽共患病学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：目的 探究EgM9基因在细粒棘球绦虫体外不同发育时期的表达情况。方法 体外培养细粒棘球绦虫原头蚴（protoscoleces, PSCs）向成虫方向发育；收集不同发育时期的虫体，通过H＆E染色进行虫体形态学观察；运用荧光定量PCR方法，以β-Actin作为内参基因，使用2-ΔΔCt法计算虫体不同发育时期EgM9基因的表达情况，用SPSS 17.0软件进行单因素方差分析。结果 最终成功建立了细粒棘球绦虫原头蚴向成虫方向发育的体外培养模型，培养虫体至50 d;体外培养的虫体在第50 d时可产生3个节片；体外培养第50 d的虫体EgM9基因的表达量最高，与其他时期虫体表达量差异有统计学意义（F=11.32,P＜0.05）。结论 EgM9基因是细粒棘球绦虫成虫阶段高表达的基因，可能与虫体性器官发育有关。
全文链接
请求原文
细粒棘球绦虫成虫蛋白的提取及特异性成分分析
《中国兽医科学 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：旨在获得特异性蛋白提取效果好的细粒棘球绦虫（Eg）成虫蛋白提取方法,采用7种方法提取Eg成虫蛋白,以ELISA、SDS-PAGE、Western-blot等检测方法比较各蛋白提取方法的提取效果,对7种蛋白提取物进行凝胶层析获得不同蛋白组分,经过ELISA、SDS-PAGE、Western-blot等检测各组分中特异性蛋白的含量,判断各提取方法的提取效果。结果表明,7种方法均能用于提取特异性蛋白;各蛋白提取物的ELISA、SDS-PAGE和Western-blot检测显示,PBS超声破碎蛋白中特异性蛋白含量较其他蛋白提取物高。凝胶层析和ELISA检测结果表明特异性蛋白分子质量较大。比较特异性组分占总蛋白的百分比发现,PBS液氮研磨蛋白、Tris-HCl超声破碎蛋白和PBS超声破碎蛋白中特异性组分较多。本研究通过分析结合物理化学7种方法提取蛋白,为寻找蛋白质组学标准物质提供了参考依据。
关键词： 棘球蚴病 细粒棘球绦虫 蛋白质组学 凝胶层析 特异性组分
全文链接
请求原文
细粒棘球绦虫TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用
《中国人兽共患病学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：目的为建立高效、特异的细粒棘球绦虫（Echinococcus granulosus,Eg）检测方法。方法本研究设计了一组基于Eg线粒体基因的特异性引物和TaqMan探针,通过反应体系及条件的优化,建立了Eg荧光定量PCR检测方法。结果该方法线性关系好,灵敏度高,在109～102拷贝/μL相关系数达0.998,灵敏度达102拷贝/L;在特异性试验中,与其他病原虫株无交叉反应,特异性较好;重复性试验变异系数均低于3%。应用该方法对50份临床样品进行检测,发现6份为Eg感染阳性。结论由此可见,建立的荧光定量PCR方法可快速、灵敏、特异地检测细粒棘球绦虫,具有一定的实际应用价值。
关键词： 细粒棘球绦虫 TaqMan探针 实时荧光定量PCR
全文链接
请求原文
抗细粒棘球绦虫疫苗候选抗原免疫犬IgG抗体水平监测及免疫组化定位研究
《中国预防兽医学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：为探究细粒棘球绦虫(E.granulosus,Eg)成熟虫体(MAW)特异性蛋白(EgM)(EgM9、EgM123)的抗Eg感染保护效果,本研究利用Eg疫苗候选抗原EgM9和EgM123重组蛋白,分别3次免疫实验犬,利用ELISA法检测免疫犬血清中IgG、IFN-γ和IL-10的变化情况,采用免疫组化法检测免疫犬肠系膜淋巴结和小肠中的特异性IgG抗体。结果显示,在第3次免疫后一周即免疫组犬抗体水平均最高时对其进行原头蚴攻击,攻毒后免疫组的抗体水平随之下降,且持续至第3次免疫后19周,免疫组均与对照组呈显著性差异(p<0.05);第3次免疫后一周免疫组犬血清中IFN-γ和IL-10水平均呈升高趋势,且至第3次免疫后23周剖检,免疫组犬的肠系膜淋巴结和小肠组织经免疫组化法均检测出特异性IgG抗体。表明用EgM重组蛋白免疫犬,可诱导其产生IgG抗体而发挥抗Eg感染保护效果,为终末宿主犬包虫病的免疫机理探究和疫苗及相关检测试剂的研制奠定了基础。
关键词： 细粒棘球绦虫 犬 EgM重组蛋白 抗体反应 免疫组织化学
全文链接
请求原文
免疫与感染细粒棘球绦虫对Beagle犬血液生理生化指标的影响
《动物医学进展 》 2018 北大核心
摘要：分析了Beagle犬免疫细粒棘球绦虫EgM家族的2个重组蛋白(EgM9和EgM123)及人工反复感染原头蚴对其血液生理生化指标造成的影响。结果显示,免疫并未引起血液各项指标出现差异;感染引致极小部分指标出现显著差异,与免疫相比结果同之。提示EgM蛋白作为候选疫苗是安全的,驱虫药物的反复服用也没有表现出明显的毒副作用,也暗示免疫和反复感染与血液生理生化指标之间未发现确切的统计学关联性,且侧面印证了Beagle犬在封闭饲养环境下已经形成了生长期血液生理生化指标具有相对稳定性的特征。
关键词： 细粒棘球绦虫 Beagle犬 免疫 感染 血液生理生化指标
全文链接
请求原文
犬细粒棘球绦虫感染胶体金检测试纸条的制备
《中国生物制品学杂志 》 2018 CSCD
摘要：目的制备犬细粒棘球绦虫感染胶体金检测试纸条。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,用于标记抗细粒棘球绦虫Ediag A864单克隆抗体2D12制作金标垫,兔抗细粒棘球绦虫Ediag A864多克隆抗体标记检测线(T线),羊抗鼠Ig标记质控线(C线),制备胶体金试纸条,并进行特异性、敏感性、重复性及稳定性试验。用优化的胶体金检测试纸条对96份犬粪样品(36份参照阳性样,60份临床样品)进行检测。结果制备的犬细粒棘球绦虫感染胶体金检测试纸条与犬蛔虫阳性粪及犬贾第虫阳性粪样品均无交叉反应;粪便稀释度为1∶4时仍可检出正确结果;3次检测参照阳性样本均为阳性;于不同温度(室温、4及37℃)下保存不同时间(1、2、3、4个月)的试纸条均可检出正确结果。96份犬粪便样品中,36份参照阳性样品检出率为97.2%(35/36),60份临床样品均为阴性。结论制备的试纸条具有良好的特异性及稳定性,可应用于临床样品检测及大规模流行病学调查。
全文链接
请求原文
犬细粒棘球绦虫感染Dot-ELISA检测方法的建立
《黑龙江畜牧兽医 》 2018 北大核心
摘要：为了建立犬细粒棘球绦虫感染Dot-ELISA检测方法,试验利用抗细粒棘球绦虫EdiagA864兔多克隆抗体进行HRP标记制备酶标抗体,以抗细粒棘球绦虫EdiagA864单克隆抗体2D12作为包被抗体,建立犬细粒棘球绦虫感染Dot-ELISA检测方法,对特异性、敏感性、重复性等进行研究,并用优化的Dot-ELISA检测方法对69份犬粪便样品进行检测。结果表明:所建立的Dot-ELISA检测方法敏感性为1∶8,与犬蛔虫阳性粪便、犬贾第虫阳性粪便均无交叉反应,使用不同批次的膜片均能得到相同结果;应用所建立的Dot-ELISA检测方法对69份犬粪便样品进行检测,其中9份人工感染参照样品的检出率为100%(9/9),60份长春地区临床样品检测结果为阴性。说明试验建立的犬细粒棘球绦虫感染Dot-ELISA检测方法具有较高的特异性和敏感性,可用于犬细粒棘球绦虫感染的临床检测。
关键词： 细粒棘球绦虫 EdiagA864 多克隆抗体 单克隆抗体 Dot-ELISA 检测
全文链接
请求原文
棘球蚴(包虫)病预防疫苗的研制与应用
《中国人兽共患病学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：棘球蚴(包虫)病的控制是一个长期的过程。20世纪90年代以前,寄生虫病的防治手段主要是药物防治,但近年来,由于寄生虫耐药风险的增加和不理想的控制效果,以及大面积药物的使用对环境的不良影响等,寄生虫病控制的研究方向逐渐向免疫预防转移。本文从棘球绦虫疫苗研制的策略,中间宿主和终末宿主抗虫疫苗的研制,以及所面临的挑战和机遇等做一综述。在我国,EG95已经大面积接种绵羊用于囊性包虫病的控制。但泡球蚴病病原的传播是循环于犬,狐狸和狼等终末宿主和鼠类之间,终末宿主抗虫疫苗研制是泡球蚴病控制研究的方向之一。
关键词： 棘球蚴(包虫)病 疫苗研制 细粒棘球绦虫 多房棘球绦虫 EG95
全文链接
请求原文
