免疫组化法检测EgM蛋白免疫犬的肠系膜淋巴结抗体靶位点的探索

巫剑; 米晓云; 张壮志; 石保新; 古努尔·吐尔逊; 张文宝; 岳城; 《中国人兽共患病学报 》 2009 北大核心 CSCD

摘要：目的检测EgM蛋白免疫后的犬肠系膜淋巴结和感染细粒棘球绦虫后的犬肠系膜淋巴结上的IgG和特异性IgG抗体。方法用免疫组织化学方法检测仅EgM免疫犬肠系膜淋巴结、EgM蛋白免疫后感染原头蚴的犬肠系膜淋巴结、感染细粒棘球绦虫(原头蚴)的犬肠系膜淋巴结上的IgG。用细粒棘球绦虫虫体分泌表达的重组蛋白EgM制备的高免特异性抗体可引起免疫犬的特异性抗体反应。结果在EgM免疫犬和感染原头蚴的犬的肠系膜淋巴结检测出IgG。结论用EgM蛋白免疫犬后可以在其肠系膜淋巴结产生特异性抗体。

关键词： 细粒棘球绦虫 犬 抗体反应 免疫组织化学

 全文链接 请求原文

犬抗细粒棘球绦虫疫苗候选蛋白EgM9的原核表达及纯化

古努尔·吐尔逊; 郭宝平; 张壮志; 赵莉; 石保新; 吐尔洪·依米提; 哈斯也提·艾力; 王进成; 米小云; 刘斌; 张文宝; 《中国动物传染病学报 》 2009

摘要：把含有EgM9基因的质粒pET-41b转化至大肠杆菌BL-21中,IPTG诱导重组质粒的表达,亲和层析纯化表达产物,用SDS-PAGE和Western blot进行分析鉴定,显示分离纯化的EgM9和GST蛋白纯度较高,1L的培养物约可以得到5mg纯化蛋白,分子量为60kDa。EgM9免疫后的血清与成熟虫体蛋白有特异性反应。融合蛋白获得高效表达,并成功纯化,初步实验证明EgM9具有良好的免疫原性,可进一步用于疫苗的免疫实验。

关键词： 细粒棘球绦虫 EgM9 疫苗候选蛋白 表达

 全文链接 请求原文

细粒棘球绦虫——原头蚴在两种细胞培养液中体外培养的初步观察

袁丽英; 张壮志; 石保新; 米晓云; 阿布都; 阿依努尔; 张玲; 阿布里克木; 王进成; 岳城; 张文宝; 《畜牧兽医杂志 》 2008

摘要：通过原头蚴在两种细胞培养液中(RPM I-1640和MEM)培养,观察其存活、生长及发育情况,从而为研究寄生虫发育提供最基本的数据资料。方法:细粒棘球绦虫幼虫——原头蚴培养的细胞培养基(RPM I-1640和MEM)分为4组:Ⅰ组为纯RPM I-1640培养液;Ⅱ组为含10%的小牛血清的1640培养液;Ⅲ组为纯MEM培养液;Ⅳ组为含10%的小牛血清的MEM培养液;并进行对比观察。结果:培养15 d的原头蚴的成活率分别为:Ⅰ组69.87%、Ⅱ组80.35%、Ⅲ组50.25%、Ⅳ组60.32%;成囊率分别为:Ⅰ组80.58%、Ⅱ组90.25%、Ⅲ组35.65%、Ⅳ组45.89%;头节外翻率分别为:Ⅰ组95.50%、Ⅱ组98.65%、Ⅲ组60.52%、Ⅳ组70.98%。结论:大多数虫体在早期向囊发育,一部分虫体头节外翻,并伴有规律的伸缩运动,但随时间的延长虫体运动减缓,又向囊蚴发育。通过对细粒棘球绦虫的原头蚴的体外培养,初步表明含有10%小牛血清的细胞培养基RPM I-1640较适合原头蚴的生长发育,在普通培养箱中培养,最适温度在37~40℃,培养液pH=7.2,初步建立了原头蚴体外培养的方法。

关键词： 细粒棘球绦虫 原头蚴 体外培养 发育 囊蚴

 全文链接 请求原文

细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的克隆、表达及鉴定

王慧; 侯秋莲; 张壮志; 张富春; 张文宝; 《中国人兽共患病学报 》 2008 北大核心 CSCD

摘要：目的克隆细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,Eg)硫氧还蛋白过氧化物酶(thioredoxin peroxidase TPx)基因,构建原核表达载体,通过诱导表达,纯化融合蛋白抗原,免疫小鼠制备抗血清。方法从包囊中分离原头蚴,抽提总RNA,采用RT-PCR的方法扩增EgTPx基因,克隆到原核表达载体pET-41b中,转化大肠杆菌BL21,经过IPTG诱导目的基因表达,SDS-PAGE对表达蛋白进行分析,通过谷胱甘肽Sepharose4B层析柱分离纯化获得重组蛋白并免疫小鼠,制备抗血清。Western blot鉴定抗血清的特异性,ELISA测定抗体的效价。结果用PCR方法扩增获得的EgTPx基因长度为582bp,经酶切鉴定和序列测定,插入到原核表达载体的基因片段为EgTPx基因,SDS-PAGE结果显示表达融合蛋白相对分子质量约为54kDa,鼠抗EgTPx抗体能与融合蛋白和天然原头蚴抗原发生特异性反应;间接ELISA法测定该抗体效价为1∶256000。结论成功地制备了鼠抗EgTPx抗体,并能够特异识别原核表达的融合蛋白EgTPx和天然原头蚴抗原,为研制有效的包虫病疫苗及相关诊断试剂盒奠定了基础。

关键词： 细粒棘球绦虫 硫氧还蛋白过氧化物酶 融合蛋白 抗血清

 全文链接 请求原文

以家犬驱虫为中心的棘球蚴病控制措施在新疆两县的应用

张壮志; 石保新; 王进成; 吐尔洪·依米提; 哈斯也提; 哈江; 胡端铭; 李伯樵; 肉孜艾山; 吴平; 王文明; 彭政; 康强; 艾尔肯; 俞进; 张文宝; 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志 》 2008 北大核心 CSCD

摘要：目的通过新疆呼图壁县和温宿县区域试验,验证以家犬(包括牧犬)驱虫为中心的棘球蚴病控制措施的可行性和控制效果。方法1987-1990年在新疆呼图壁县和1990-1994年在新疆温宿县分别建立棘球蚴病控制试验区,采用消灭病原以阻断循环链的控制策略,即"犬犬驱虫、月月投药"的措施,对试验区所有家犬用吡喹酮药饵剂型进行预防性驱虫。实施控制措施后,每年在试验区检测犬的细粒棘球绦虫和绵羊的棘球蚴感染率,以评价驱虫效果。结果经过连续3￣4年实施"犬犬驱虫、月月投药"措施,呼图壁县和温宿县的家犬细粒棘球绦虫平均感染率分别从实施前的18.5%和14.7%降为0;两县新生绵羊的棘球蚴平均感染率比控制模式实施前降低了85%以上。结论以家犬驱虫为中心的策略,即"犬犬驱虫,月月投药"的措施对控制家犬的棘球绦虫病和绵羊的棘球蚴病是有效可行的。

关键词： 棘球蚴病 细粒棘球绦虫 控制策略 家犬 驱虫 吡喹酮

 全文链接 请求原文

爱普锐克吞食片对犬细粒棘球绦虫驱除试验

石保新; 张壮志; 王进成; 李欣; 雒燕; 王文明; 蒲元席; 艾尔肯; 张文宝; 《动物医学进展 》 2008 北大核心

摘要：观察爱普锐克吞食片(每片含吡喹酮100mg)对犬细粒棘球绦虫驱除效果。将人工感染细粒棘球绦虫实验犬分设5组,Ⅰ组试验药品2.5mg/kg,Ⅱ组试验药品5mg/kg,Ⅲ组试验药品7.5mg/kg,Ⅳ组对照药品5mg/kg,Ⅴ组空白对照。投药后72h剖解试验犬,检查各组荷虫情况。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组粗计驱虫率均为100%。5mg/kg推荐剂量可成为犬细粒棘球绦虫成熟期前驱除的有效剂量。

关键词： 爱普锐克吞食片 吡喹酮 细粒棘球绦虫 犬

 全文链接 请求原文

抗细粒棘球绦虫基因工程疫苗的研究进展

郅琦; 黄庆红; 张壮志; 杜军; 石保新; 张文宝; 王进成; 黄丽倩; 《地方病通报 》 2008

关键词： 细粒棘球绦虫 疫苗抗原,传统 疫苗,基因工程 综述

 全文链接 请求原文

用ELISA方法检测原头节及EgM免疫犬IgG变化情况

郭宝平; 张壮志; 张文宝; 石宝新; 古努尔·吐尔逊; 吐尔洪·依米提; 哈斯也提艾力; 王进成; 《地方病通报 》 2007

摘要：目的用不同的抗原检测免疫犬后的血清,判定所引起的IgG变化和有无与其他虫种的交叉反应。方法在用原头节可溶性粗抗原和EgM家族重组表达蛋白对犬的免疫保护实验中,以原头节可溶性粗抗原、细粒棘球绦虫成虫可溶性粗抗原和多头绦虫可溶性粗抗原包被检测时,通过间接ELISA的方法检测其中的特异性抗体IgG的变化规律及与多头绦虫抗原有无交叉反应。结果原头节可溶性粗抗原检测出相对应免疫组实验犬IgG应答变化情况,同时用细粒棘球绦虫成虫包被抗原亦检测出IgG存在一定差异,但不十分明显,与多头绦虫无交叉反应。检测EgM重组蛋白免疫组IgG时它们存在一定差异,但不十分明显。结论原头节可溶性粗抗原免疫组通过ELISA的方法较为准确地检测出其IgG的应答情况;EgM重组蛋白免疫组的抗体检测仍需进一步完善。

关键词： 原头节 可溶性粗抗原 细粒棘球绦虫 多头绦虫 ELISA IgG

 全文链接 请求原文

细粒棘球绦虫EgA31重组抗原与其它寄生蠕虫的免疫交叉反应

由弘; 傅玉才; 张立民; 张壮志; 王进成; 《寄生虫与医学昆虫学报 》 2004

摘要：为了研究细粒棘球绦虫EgA31重组蛋白的抗原性 ,作者将细粒棘球绦虫 6 6kDa抗原的cDNA克隆EgA31 3′端 5 0 0bp碱基片断亚克隆入pGEX 5X表达质粒 ,构建EgA31 GST重组蛋白原核表达系统 ,所制备的重组蛋白免疫豚鼠获得抗血清 ;免疫试验表明该抗血清可识别EgA31 GST重组蛋白及细粒棘球绦虫 6 6kDa抗原 ,也可与多房棘球蚴、犬复孔绦虫、犬钩虫、日本血吸虫的成虫虫体总蛋白 6 6kDa抗原分子发生交叉反应 ,提示EgA31抗原分子在上述虫体中均有存在

关键词： 细粒棘球绦虫 EgA31重组抗原 免疫交叉反应

 全文链接 请求原文

用ELISA法观察模型小鼠原发性感染细粒棘球绦虫后特异性抗体的变化规律

由弘; 张文宝; 乌斯满江; 哈斯也提; 吐尔洪; 普拉提; 王进成; 张壮志; 《中国兽医寄生虫病 》 2003

摘要：　分别用较高纯度的细粒棘球绦虫六钩蚴抗原和传统使用的囊液抗原对一次感染和二次感染细粒棘球绦虫六钩蚴的小鼠血清进行ELISA测定,认为寄生于不同部位的包囊刺激机体产生的抗体水平不同,同时检测早期抗体时,六钩蚴抗原比囊液抗原更具有阶段性优越性。小鼠二次感染六钩蚴后六钩蚴抗体水平得到明显加强,并推测认为一次感染产生的六钩蚴抗体可能是具有保护性的抗体。

关键词： 原发性 细粒棘球绦虫 特异性抗体 模型小鼠

 全文链接 请求原文